犬脐静脉血管内皮细胞的分离培养与鉴定

摘要：

目的 建立一种简便、高效的犬脐静脉血管内皮细胞分离方法,并进行培养和鉴定. 方法 无菌条件下取12只新生比格犬脐带共12根,脐带长(13.0±1.5)cm.PBS液冲洗后,各取4根脐带注入1％Ⅰ型胶原酶分别消化脐静脉5、7、10 min后,收集细胞并行锥虫蓝计数；倒置相差显微镜下观察细胞形态,待细胞爬满培养瓶后以1∶2比例传代.取Ⅰ型胶原酶消化7 min获得的第3代细胞,通过免疫荧光染色和流式细胞仪检测细胞中血管假性血友病因子(von Willebrand factor,vWF)和血小板-内皮细胞黏附分子CD31表达,进行细胞鉴定；MTT检测细胞增殖. 结果 消化5、10 min后未收集到或偶尔收集到血管内皮细胞；消化7 min可见大量血管内皮细胞,培养24 h后细胞呈多角形,随培养时间延长细胞逐渐呈“铺路石”样生长,细胞核较大,多为单核,少数细胞为双核,传代后细胞形态无明显变化.荧光倒置显微镜下观察,培养细胞vWF和CD31表达阳性；流式细胞仪检测示培养细胞vWF阳性表达率为99.0％±0.7％,CD31阳性表达率为98.0％±1.2％,提示培养细胞为血管内皮细胞.MTT检测示,随培养时间延长,血管内皮细胞增殖速度明显提高. 结论 采用酶消化法从犬脐静脉中分离培养血管内皮细胞操作简便,且细胞数量多、纯度高.

关键词：血管内皮细胞、脐静脉、细胞培养、细胞鉴定、犬

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资助基金：全军医院重大高新技术项目2010GXZS095;首都医学发展科研基金资助项目2009-2040

在线出版日期：2013-05-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：460-463