BMP-14转染脂肪来源干细胞后与软骨细胞共培养的实验研究
目的 研究BMP-14与软骨细胞共同诱导脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)向软骨细胞分化是否具有协同作用,优化软骨组织工程种子细胞来源.方法 取2只雄性新西兰大白兔(体重1.5、2.0 kg)关节软骨和皮下脂肪组织,分离、培养软骨细胞和ADSCs,取第3代细胞进行实验.对ADSCs行成骨(茜素红染色)、成软骨(阿利新蓝染色)和成脂(油红O染色)诱导鉴定.测定Ad-巨细胞病毒-BMP-14-内部核糖体进入位点-人源化海肾绿色荧光蛋白l转染的最佳感染复数(multiplicity of infection,MOI)并以其转染ADSCs.实验分为5组:A组,采用Transwell小室将BMP-14转染的ADSCs与软骨细胞共培养(1∶1)；B组,采用Transwell小室将未转染的ADSCs与软骨细胞共培养(1∶1)；C组,单纯BMP-14转染的ADSCs培养；D组,单纯软骨细胞培养；E组,单纯ADSCs培养.培养3周后,取细胞采用阿利新蓝法检测糖胺聚糖(glycosaminoglycan,GAG)含量,Western blot检测BMP-14和Ⅱ型胶原蛋白表达,RT-PCR检测Sox-9基因表达.结果 培养细胞经鉴定提示为ADSCs.倒置荧光显微镜观察示,MOI值为150时转染效果最好.A、C组GAG含量、BMP-14和Ⅱ型胶原蛋白表达以及Sox-9基因表达均明显高于其余3组,A组高于C组,差异均有统计学意义(P＜ 0.05);B、D组均明显高于E组(P＜0.05),B、D组间差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 BMP-14与软骨细胞能共同诱导并促进兔ADSCs向软骨细胞分化,两者之间具有协同作用.
软骨组织工程、脂肪来源干细胞、BMP-14、软骨细胞、共培养、兔
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2013-05-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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