残耳软骨细胞诱导脂肪来源干细胞体外软骨形成实验研究
目的 探讨残耳软骨细胞能否在体外模拟软骨诱导微环境,促进脂肪来源干细胞(adipose derived stem cells,ADSCs)向软骨分化并形成软骨样组织. 方法 取外耳再造术中废弃的先天性小耳畸形患者残耳软骨组织与皮下脂肪组织分离培养,分别收集第2代残耳软骨细胞与第3代ADSCs,以3∶7比例混合培养作为实验组(A组),单纯残耳软骨细胞和单纯ADSCs作为对照(分别为B组和C组).取各组细胞1.0×106个离心培养获得细胞球后,体外培养28 d,大体观察各组细胞球取材时的外观变化,测量湿重；阿利辛蓝比色法检测糖胺多糖(glycosaminoglycan,GAG)含量；RT-PCR检测各组标本的Ⅱ型胶原、蛋白聚糖(Aggrecan) mRNA表达；并行HE、甲苯胺蓝、番红O组织学观察及Ⅱ型胶原免疫组织化学检测. 结果 体外培养28 d后,A、B组标本形成白色半透明圆盘状组织块,表面光滑,弹性可；C组标本组织块有明显收缩,呈黄色球状,无弹性.A、B组标本湿重及GAG含量显著高于C组(P＜0.05)；A、B组间差异无统计学意义(t=1.820 3,P=0.068 7;t=1.861 4,P=0.062 7).RT-PCR检测示A、B组标本均可见Ⅱ型胶原与Aggrecan mRNA条带清晰表达,C组未见明显表达；A、B组Ⅱ型胶原与Aggrecan mRNA表达均显著高于C组(P＜0.05),A、B组间差异无统计学意义(t=1.457 6,P=0.144 9;t=1.519 5,P=0.128 6).组织学观察示:A组与B组细胞球标本形成了大量软骨陷窝样结构,细胞外基质均有不同程度染色；C组细胞球标本组织内主要为纤维性成分,未见软骨陷窝,细胞外基质染色阴性.A、B组可见在软骨陷窝周围有不同程度棕黄色沉淀即Ⅱ型胶原表达,C组未见明显表达；A、B组灰度值显著低于C组(P＜0.01),A、B组间差异无统计学意义(t=1.661 5,P=0.097 0). 结论 残耳软骨细胞可在体外独立模拟软骨诱导微环境,促进ADSCs软骨定向分化并形成软骨组织.
残耳软骨细胞、脂肪来源干细胞、细胞球、共培养
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国家自然科学基金资助项目30570470;四川省卫生厅课题资助项目110193;四川省科技厅课题资助项目2001Z021
2013-03-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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