不同浓度地塞米松对人骨关节炎软骨细胞凋亡及Fas/FasL基因表达的影响
目的 糖皮质激素会破坏软骨,通过观察地塞米松对人骨关节炎软骨细胞(human articular chondrocytes,HACs)凋亡及Fas/FasL基因表达的影响,探讨其促进HACs凋亡的作用机制.方法 取行人工膝关节置换的膝骨关节炎患者自愿捐赠软骨组织,体外分离培养HACs,取第2代细胞进行实验.将HACs分别置于含浓度为0.125、1.25、12.5、25及50μg/mL地塞米松培养液中,培养48 h后采用MTT法选择地塞米松最佳工作浓度进行后续实验.将HACs分别采用最佳工作浓度地塞米松(实验组)及不含地塞米松培养液(对照组)培养,0、24、48 h后行TMRE/Hoechst/Annexin V-FITC/7-AAD四重染色检测细胞凋亡,48 h后行实时定量PCR检测Fas/FasL mRNA表达,0、24、48 h后行免疫组织化学染色检测Fas/FasL蛋白表达.结果 25 μg/mL浓度组细胞抑制率显著高于50 μg/mL浓度组,差异有统计学意义(P＜0.05);与其他浓度组比较,差异亦有统计学意义(P＜0.05);选择25 μg/mL浓度作为后续实验工作浓度.培养0、24、48 h,实验组HACs凋亡细胞百分比分别为5.8％±0.3％、27.0％±2.6％、36.0％±3.1％,呈明显时间依赖性(P＜0.05).培养48 h后实验组及对照组Fas mRNA相对表达量分别为(8.93±1.12)× 10-3及(3.31±0.37)×10-3,FasL mRNA相对表达量分别为(5.92±0.66)×10-3及(2.31±0.35)×10-3,两组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).随培养时间延长,实验组Fas及FasL蛋白表达逐渐增加,且各时间点均显著高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 地塞米松可促进HACs细胞凋亡及上调凋亡基因Fas/FasL表达,为进一步探讨Fas/FasL信号通路在地塞米松促HACs凋亡中的作用提供了实验依据.
地塞米松、骨关节炎、人关节软骨细胞、细胞凋亡、Fas/FasL
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R644(创伤外科学)
上海市卫生局局级科研项目2009218
2012-10-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
536-541
