hBMP-7基因在脂肪源性干细胞中的表达及对其向成骨细胞分化的影响

摘要：

目的 构建hBMP-7基因真核表达载体,观察其在兔脂肪源性干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)的表达,并观察其对ADSCs向成骨细胞分化的影响.方法 3月龄清洁级健康日本大耳白兔,雌雄不限,体重3～4 kg.取兔皮下脂肪约5 mL,采用胶原酶消化离心贴壁培养法培养ADSCs,取第3代细胞进行实验;CD44、CD49d、CD106免疫荧光染色鉴定ADSCs.构建真核表达载体pcDNA3.1-hBMP-7,经鉴定后利用LipofectamineTM 2000介导转染ADSCs,免疫组织化学染色检测hBMP-7在ADSCs中的表达;ALP定量测定、Ⅰ型胶原免疫荧光检测hBMP-7基因转染对ADSCs向成骨细胞分化的影响.结果 倒置相差显微镜观察示ADSCs呈梭形、多角形分布;表面抗原标志CD44、CD49d呈阳性表达,CD106呈阴性表达.成功构建pcDNA3.1-hBMP-7真核表达载体,并利用脂质体介导的方法成功导入ADSCs中,免疫组织化学染色提示hBMP-7能在ADSCs中表达.ALP定量测定示,转染后7、10、14 d pcDNA3.1-hBMP-7转染组(实验组)ALP活性明显高于pcDNA3.1空载体转染组(对照组),差异有统计意义(P＜0.05);转染后7、14 d,实验组Ⅰ型胶原表达量均高于对照组(P＜0.05).结论 构建的真核表达载体pcDNA3.1-hBMP-7可在兔ADSCs中表达,且转染后的ADSCs ALP定量测定、成骨标志物Ⅰ型胶原的表达均高于pcDNA3.1空载体转染细胞,为开展以干细胞为载体的局部基因治疗奠定了基础.

关键词：hBMP-7、脂肪源性干细胞、基因转染、成骨细胞、兔

所属期刊栏目：25

分类号：R382.31(医学寄生虫学)

资助基金：内蒙古自治区自然科学基金2010MS1109

在线出版日期：2011-12-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：848-853