人羊水来源干细胞参与小鼠损伤肌肉修复的实验研究
目的 研究人羊水来源干细胞(human amnioticfluid colony derived stem cells,hAFCSCs)是否参与小鼠肌肉损伤修复过程,探讨应用hAFCSCs治疗肌肉损伤的方法及可行性.方法 B超引导下穿刺抽取人孕中期羊水,体外分离、培养得到hAFCSCs,取第6～8代细胞备用,同时提取总RNA行RT-PCR鉴定干细胞相关基因.取16只6～8周龄Nod/Scid小鼠,体重20～24 g,利用心肌毒素联合X线照射建立双侧胫骨前肌肌肉损伤模型,右侧胫骨前肌内注射hAFCSCs(3.3×107个/mL)30μL作为实验组,左侧胫骨前肌同法注射等量完全培养液(含15%FBS、18%Chang B、2%Chang C、1%青链霉素、1%L-谷氨酰胺的α-MEM培养基)作为对照组.细胞移植术后2、4周各处死小鼠8只,取材行肝细胞生长因子受体(c-Met)、成肌调节因子(Myf-5)、层粘连蛋白(Laminin)、结蛋白(Desmin)与人特异性细胞核有丝分裂器(NuMa)组织免疫双重荧光染色观察.结果 原代hAFCSCs培养5～7 d后可见细胞克隆形成;8～10 d后可挑取细胞形态均一的克隆进行稳定传代,6～8代后可获得足量的干细胞.RT-PCR检测示所获得hAFCSCs体外扩增培养至第6代仍表达干细胞相关基因.细胞移植术后2周免疫双重荧光染色示,实验组胫骨前肌内检测到NuMa表达,未检测到hAFCSCs表达肌源性细胞相关表型;术后4周,实验组胫骨前肌内检测到NuMa表达,部分细胞同时表达NuMa和c-Met、Myf-5,部分肌纤维同时表达NuMa和Desmin、Laminin.术后2、4周,对照组胫骨前肌均未检测到NuMa表达.结论 hAFCSCs体外培养后移植到小鼠肌肉损伤部位,可参与损伤肌肉的修复过程.
人羊水来源干细胞、细胞治疗、骨骼肌损伤、小鼠
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R685(骨科学（运动系疾病、矫形外科学）)
上海市科委项目08JC1416000
2011-12-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
842-847
