人脐静脉血管内皮细胞体外培养的方法研究
目的 建立人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)体外高效稳定培养的方法,为组织工程及相关医学摹础研究提供稳定的细胞来源. 方法 取自愿捐赠足月妊娠分娩的新生儿脐带,用自制空针软管静脉注入0.1%Ⅱ型胶原酶,置于37℃培养箱中,消化收集,采用含5%FBS及1%内皮细胞生长因子(endothelial cell growth factor,ECGS)的内皮细胞专用培养基进行培养.将消化前后的脐带标本行HE染色,观察HUVECs脱壁情况;流式细胞仪检测原代细胞纯度;细胞培养期间于倒置相差显微镜下观察细胞形态;取第3代HUVECs行免疫细胞化学染色观察、MTT榆测细胞增殖情况,并将细胞接种于细胞外基质胶Matrigel上培养24 h,观察细胞管腔形成情况. 结果 经Ⅱ型胶原酶消化后的脐带内HUVECs大量脱落,细胞消化完全.经Ⅱ型胶原酶37℃培养箱中消化15 min后,可获得纯度为99.56%的HUVECs;原代HUVECs培养后2～3 d生长最快,呈典型的铺路石或鹅卵石样排列,4～6 d融合成片.MTT法检测显示第3代HUVECs培养后3～4d细胞生长最快,5 d左右融合;免疫细胞化学染色显示内皮细胞Ⅷ因子相关抗原表达阳性,培养24 h后在细胞外基质胶Matrigel上可见类似于毛细血管的完整闭合管腔形成. 结论 经自制空针软管静脉注入0.1%Ⅱ型胶原酶,使静脉充分充盈,内皮消化完全,采用含5%FBS和1%ECGS的内皮细胞专用培养基,可迅速获取人量高纯度、高存活率的HUVECs.
组织工程、种子细胞、人脐静脉血管内皮细胞、细胞培养
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R3(基础医学)
2011-04-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
139-143
