单层分步法诱导人胚胎干细胞定向肝样细胞分化

摘要：

目的 采用单层分步法诱导入胚胎干细胞(human embryonic stem cells,hESCs)分化为肝样细胞,建立hESCs分化为肝细胞的诱导体系.方法 将hESC株H1细胞接种到Matrigel包被的培养板上,早期(细胞贴壁4d后)加入含有细胞因子活化素A(Activin A)的分化液诱导5 d;中期将诱导液换为含FGF-1和BMP-4的肝分化液诱导6 d;最后添加肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)和制癌蛋白M(Oncostatin M,OSM)继续诱导分化5～7 d.采用免疫细胞化学染色、RT-PCR、过碘酸-雪夫(Periodicacid-Schiff,PAS)反应鉴定分化细胞的性质.结果 经Activin A、FGF-1、BMP-4、HGF和OSM连续诱导的hESCs呈多角形、卵圆形或圆形,排列紧密;部分细胞出现二核或二三核,呈现肝细胞所特有的形态.分化细胞在诱导早期表达SOX17、叉头框(Forkhead box,FOX)A2、GATA-4,中期表达甲胎蛋白(αfetoprotein,AFP)、白蛋白、角蛋白18,晚期表达成熟肝细胞特异性基因乙醇脱氢酶1C、细胞色素P4501B1.免疫细胞化学染色示,Activin A诱导后,细胞呈SOX17和FOXA2阳性;经FGF-1和BMP-4诱导后,呈AFP和α1抗胰蛋白酶阳性.HGF和OSM诱导后,PAS糖原染色检测阳性.结论 采用单层分步法逐步添加细胞因子,可诱导hESCs分化为肝样细胞.该分化体系可为肝细胞移植、肝组织工程等临床治疗提供一个有效的细胞来源.

关键词：人胚胎干细胞、单层分步诱导、肝细胞、分化、组织工程

所属期刊栏目：24

分类号：Q813.1;R318.11(生物工程学(生物技术))

资助基金：云南省科技计划;云南省科技计划

在线出版日期：2010-11-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：838-842