成肌细胞移植治疗假肥大型肌营养不良症的实验研究

摘要：

目的 研究成肌细胞移植治疗假肥大型肌营养不良症(duchenne muscular dystrophy,DMD)的效果,探讨基因治疗DMD的方法及可行性. 方法 用多步酶消化法与差速贴壁法培养C57/BL10小鼠成肌细胞,倒置相差显微镜观察细胞形态.取第4代细胞用5-BrdU标记.将24只DMD模型鼠--mdx小鼠(4～6周龄,雄性,体重13.8～24.6 g)随机分为两组(n=12),A组经尾静脉分2次(间隔2周)注射1×106个/mL标记后成肌细胞,B组同法注射1 mL DMEM/F12培养基为对照.术后4周采用一次性游泳力竭实验检测小鼠运动能力,处死后取材行HE染色及5-BrdU、结蛋白、抗肌萎缩蛋白(dystrophin,Dys)免疫组织化学染色观察,并行图像分析. 结果 原代成肌细胞培养5～7 d后即可传代,可获得稳定传代及足量的细胞.A组小鼠一次性游泳力竭时间为(60.72±5.76)min,B组为(47.77±5.40)min,两组比较差异有统计学意义(P<0.01).术后4周HE染色示A组可见变成圆形且透明染色的肌细胞,肌纤维细胞核中心移位(centrally nucleated fibers,CNF)比例为67%;B组肌纤维粗细不等,可见肥大、萎缩、变性和肌纤维坏死等改变,CNF比例>80%.免疫组织化学染色示,A组5-BrdU、结蛋白、Dys表达均呈阳性,B组少见表达或呈阴性表达.图像分析结果显示,A、B组结蛋白积分吸光度(IA)值分别为489.70±451.83和71.15±61.14,阳性面积占视野总面积的比值分别为0.314 3±0.197 3和0.102 8±0.062 8(P<0.05);Dys IA值分别为5 424.64±2 658.01和902.12±593.51(P>0.05),阳性面积占视野总面积的比值分别为0.323 7±0.117 7和0.035±0.032 9(P<0.05). 结论 成肌细胞移植治疗小鼠DMD有一定的治疗作用.

关键词：成肌细胞、假肥大型肌营养不良症、基因治疗、5-BrdU标记、mdx小鼠

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分类号：R746.2;Q813.3(神经病学与精神病学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目30200085

在线出版日期：2009-12-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1224-1228