脐血CD34+细胞体外诱导肝样细胞的研究
目的 探讨通过细胞因子及其组合体外诱导脐血CD34+细胞转分化成肝样细胞的效果.方法 采用密度梯度离心法分离脐血单个核细胞(mononuclear cell,MNC),从MNC中获得富集CD34+细胞.选用人白血病抑制因子、制瘤素M、bFGF、aFGF、肝细胞生长因子、EGF及干细胞生长因子7种细胞因子,浓度分别为10、10、10、10、20、20和50 ng/mL,设计了49种细胞因子组合,分别采用这些细胞因子组合体外培养脐血CD34+细胞,培养周期为28 d.以新鲜脐血CD34+细胞作为对照.每7天检测诱导后细胞中细胞角蛋白19(cytokcratin19,CK-19)、CK-18、谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase,GS)、人血清白蛋白(albumin,ALB)以及甲胎蛋白(α-fetoprotein,AFP)的mRNA转录情况,并应用免疫荧光法、过碘酸-雪夫(periodic acid-schiff,PAS)染色与吲哚菁绿(indocyanme green,ICG)染色法检测细胞分泌ALB、合成糖原以及解毒能力,以此判断是否存在脐血CD34+细胞体外向肝样细胞的转分化.结果 在经细胞因子诱导后的CD34+细胞中均可检测到人肝细胞所能表达的CK-19、CK-18和GS的mRNA条带,未能检测出肝细胞特征性的ALB与AFP的mRNA条带;而新鲜脐血CD34+细胞中以上5种蛋白的mRNA均未能检出.免疫荧光染色观察示诱导前后的细胞中均未能检测到ALB的表达,且均不能有效吞噬ICG染料.PAS反应检测结果显示,经细胞因子诱导后的细胞紫红色糖原沉积区域较新鲜脐血CD34+细胞增大,出现紫红色区域的细胞增多.结论 脐血CD34+细胞体外经细胞因子组合诱导后,虽有肝细胞相关蛋白mRNA表达,但未能转分化为肝样细胞.
脐血CD34《’+》细胞、体外培养、肝样细胞、转分化、细胞因子
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Q813;R657.3(生物工程学(生物技术))
上海市生物医药重大科技攻关资助项目05DZ19328
2008-07-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共6页
747-752
