膀胱平滑肌细胞与小肠黏膜下层体外复合培养的实验研究

摘要：

目的 探讨体外快速培养犬膀胱平滑肌细胞的方法及观察膀胱平滑肌细胞在脱细胞小肠黏膜下层(small intestinal submucosa,SIS)上的生长状况,为构建组织工程膀胱平滑肌组织提供实验依据.方法 分别采用酶消化法和组织块培养法分离、获取和原代培养犬膀胱平滑肌细胞,倒置相差显微镜下观察细胞的生长情况,透射电镜观察细胞的超微结构,免疫组织化学染色进行细胞鉴定.将犬膀胱平滑肌细胞接种到SIS支架材料上,于复合培养5、7及9 d取材,行苏木素染色、石蜡切片HE染色和扫描电镜观察膀胱平滑肌细胞在SIS上的生长状况.以细胞-SIS复合培养组为实验组,以膀胱平滑肌细胞为对照组,每组各设9孔,分别于接种后3、5及7 d取材,酶消化后收集细胞并计数.结果 酶消化法原代培养获取犬膀胱平滑肌细胞数量多,细胞生长速度快,形态良好,培养5 d细胞在培养瓶底生长汇合.组织块培养法接种3 d见长梭形的膀胱平滑肌细胞从植块边缘萌出,获取的细胞数量较少.透射电镜下见膀胱平滑肌细胞胞质中有特征性细肌丝和细胞膜的密斑.抗α-肌动蛋白免疫组织化学染色胞浆呈棕黄色阳性反应.膀胱平滑肌细胞在SIS表面能黏附、生长和增殖.体外复合培养5 d后,膀胱平滑肌细胞铺满SIS表面,呈单层细胞结构.7、9 d细胞形态与5 d相似.实验组3、5及7 d的细胞计数分别为(16.85±0.79)×105、(39.74±2.16)×105及(37.15±2.02)×105个,对照组分别为(19.43±0.54)×105、(34.50±1.85)×105及(33.07±1.31)×105个.两组5 d细胞计数差异有统计学意义(P＜0.05).结论 酶消化法原代培养膀胱平滑肌细胞可提供大量活性良好的种子细胞.SIS支持膀胱平滑肌细胞黏附和生长,可为构建组织工程膀胱平滑肌组织提供良好支架.

关键词：膀胱平滑肌细胞、小肠黏膜下层、体外培养、犬

所属期刊栏目：21

分类号：R318;R69(医用一般科学)

资助基金：中国博士后科学基金20070410389

在线出版日期：2008-03-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1366-1370