Oligofectamine介导转录因子SP1诱骗性寡核苷酸转染猪内皮细胞系条件的优化研究
目的 确定SP1诱骗性寡核苷酸(Decoy Oligodeoxynucleotides,ODNs)在Oligofectamine介导下转染猪血管内皮细胞系SV-40-PED的最佳转染条件和效果.方法 以SV-40-PED为转染对象,在6孔培养板中,接种SV-40-PED细胞2×105/孔,将4 μl Oligofectamine和不同浓度的SP1 ODNs(2.5、5.0、7.5、10.0和12.5 μl)分别溶于100 μl无血清、无抗生素的DMEM培养基,室温放置20 min后转染细胞,SP1 ODNs最终浓度分别为50、100、150、200和250 nmol/L、转染26 h检测不同浓度转染情况,确定最佳SP1 ODNs与Oligofectamine的比率、转染时间;流式细胞仪检测细胞内的相对荧光强度及摄取率评价转染效率;荧光显微镜观察细胞内荧光分布;测定细胞上清乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)含量,观察细胞损伤情况. 结果 SV-40-PED在Oligofectamine的介导下可以摄取SP1 ODNs.SP1 ODNs终浓度为50、100、150 nmol/L 组细胞形态无明显变化,终浓度为200、250 nmol/L组细胞收缩、变圆后逐渐恢复;SP1 ODNs终浓度为250 nmol/L时, 转染26 h时细胞形态也无明显变化,48、72 h时有细胞漂浮现象.荧光下观察,转染成功各组荧光物质分布于细胞核内,其中SP1 ODNs终浓度为200、250 nmol/L组可见清晰核仁,浓度越高,荧光强度越强,细胞内荧光物质主要聚集于细胞核.SP1 ODNs终浓度为250 nmol/L时,转染72 h组LDH浓度为137.12±3.92 U/L,显著高于26 h的49.61±17.13 U/L和48 h的120.26±8.42 U/L,均有统计学意义(P＜0.01);当转染时间为26 h时,各浓度组上清液LDH值差异无统计学意义(P＞0.05). 结论 SP1 ODNs终浓度为250 nmol/L、转染26 h时可以为SV-40-PED转染提供良好效果.
SP1诱骗性寡核苷酸、转录因子、转染、猪内皮细胞系
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R782;Q813(口腔科学)
国家高技术研究发展计划863计划2003AA205009;教育部高等学校博士学科点专项科研基金20040487077
2007-09-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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