肌肉转录调节因子和连接蛋白43基因表达对大鼠成纤维细胞分化的生长特性及生物学功能影响

摘要：

目的 通过观察转染肌肉转录调节因子(myoblast determining, MyoD)基因和连接蛋白43(connexin 43, Cx43)基因的大鼠成纤维细胞(fibroblast, FB)分化生长及生物学功能的改变,初步探讨MyoD和Cx43基因转染FB治疗缺血性心脏病(ischemic heart disease, IHD)的可能机制和途径.方法 构建真核表达的质粒载体pLenti6/V5-DEST-MyoD和pLenti6/V5-DEST-Cx43, 利用慢病毒表达系统,将MyoD和Cx43基因转入大鼠RFL-6 FB; 经终浓度为50 μg/ml的Blasticidin进行筛选培养后,通过RT-PCR、Western blot等分子生物学手段确定MyoD和Cx43的转录和表达情况;借助免疫细胞化学、显微镜观察等手段对MyoD的肌肉特异性蛋白和Cx43连接蛋白进行检测,并观察转染后FB的生长情况. 结果 RT-PCR和Western blot检测出MyoD和Cx43基因转染后FB表达了相应mRNA及其蛋白,免疫细胞化学检测转染的FB细胞中Desmin、α-actin呈阳性表达.经分化培养基诱导,培养1周后,FB出现多细胞融合及肌管形成. 结论 MyoD及Cx43基因转染可改变FB的生物学特性,转向分化为成肌细胞,并能形成多核肌管及连接蛋白,形态学也得以证实,为进一步研究MyoD和Cx43基因转染FB治疗IHD提供了实验基础.

关键词：肌肉转录调节因子、连接蛋白43、基因转染、慢病毒载体、成纤维细胞

所属期刊栏目：21

分类号：R344.13;Q254(人体生物化学、分子生物学)

资助基金：国家自然科学基金30471719

在线出版日期：2007-09-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：857-861