实时荧光定量PCR方法应用于药品无菌快速检测的研究

摘要：

目的 建立应用实时荧光定量PCR进行无菌快速检测的方法.方法 选取金黄色葡萄球菌及大肠埃希菌,用裂解试剂盒抽提细菌基因组DNA,进行实时荧光定量PCR检测,并应用叠氮溴化丙锭(PMA)抑制样品中死菌基因组DNA的PCR扩增.结果 PMA能有效去除样品中死菌干扰,针对16S rRNA基因保守序列进行扩增的荧光定量PCR方法具有较高的灵敏度.在金黄色葡萄球菌和大肠埃希氏菌检测中,最低含菌量组与阴性对照组Ct值有明显差异(P＜0.05),其最低检出限为2 CFU/PCR.在对人工污染药品的无菌检测中,该方法与药典检测方法结果一致.结论 进行无菌检查时,采用PMA去除样品中死菌基因组DNA干扰,以裂解试剂盒抽提细菌基因组后用荧光定量PCR分析样品中细菌污染,可将检测时间缩短到4h左右,操作简单,灵敏性高,可应用于药品无菌检查的快速筛查.

关键词：荧光定量PCR、叠氮溴化丙锭、细菌污染、快速检测

所属期刊栏目：30

分类号：R917.101(药物基础科学)

资助基金：广东省科技计划项目2011B031500029

在线出版日期：2014-01-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1333-1337