富氢水通过降低小鼠神经细胞OGD/R后过度自噬减轻细胞损伤

摘要：

目的:探讨富氢水是否通过影响小鼠海马神经元细胞株（HT22细胞）氧糖剥夺/复氧（OGD/R）后自噬水平而发挥细胞损伤的保护作用。方法:取体外培养的对数增长期小鼠HT22细胞，用细胞增殖与毒性检测试剂盒（CCK-8）检测细胞活性，寻找Na
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4的最佳制模浓度。将HT22细胞分为对照组（NC组）、OGD/R组（无糖培养基+ 10 mmol/L Na
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4处理90 min后换正常培养基继续培养4 h）和富氢水处理组（HW组，无糖培养基+ 10 mmol/L Na
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4处理90 min后换含富氢水培养基继续培养4 h）。采用倒置显微镜观察HT22细胞形态；CCK-8法检测细胞活性；透射电镜观察细胞超微结构；免疫荧光法检测微管相关蛋白1轻链3（LC3）、Beclin-1的表达；蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测细胞自噬标志物LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1的蛋白表达。
结果:倒置显微镜下显示：与NC组比较，OGD/R组细胞状态差，胞体肿胀，可见细胞裂解碎片，细胞活性明显降低〔（49.1±2.7）%比（100.0±9.7）%，
P<0.01〕；与OGD/R组比较，HW组细胞状态改善，细胞活性明显升高〔（63.3±1.8）%比（49.1±2.7）%，
P<0.01〕。透射电镜下显示：与NC组比较，OGD/R组细胞神经元核膜溶解，可见较多数量自噬溶酶体；与OGD/R组比较，HW组细胞神经元损伤减轻，自噬溶酶体数量明显减少。免疫荧光法检测结果显示：与NC组比较，OGD/R组细胞LC3和Beclin-1的表达明显增强；与OGD/R组比较，HW组LC3和Beclin-1的表达明显减弱。Western blotting检测结果显示：与NC组比较，OGD/R组细胞LC3Ⅱ/Ⅰ和Beclin-1的蛋白表达均明显升高（LC3Ⅱ/Ⅰ：1.44±0.05比0.37±0.03，Beclin-1/β-actin：1.00±0.02比0.64±0.01，均
P<0.01）；与OGD/R组比较，HW组细胞LC3Ⅱ/Ⅰ和Beclin-1的蛋白表达均明显降低（LC3Ⅱ/Ⅰ：0.54±0.02比1.44±0.05，Beclin-1/β-actin：0.83±0.07比1.00±0.02，均
P<0.01）。
结论:富氢水对OGD/R致HT22细胞损伤有明显的保护作用，其机制可能与抑制自噬相关。

关键词：糖氧剥夺再复糖复氧、HT22细胞、富氢水、自噬

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资助基金：贵州省卫生健康委科学技术基金项目gzwkj2021-039;Science and Technology Fund Project of Guizhou Provincial Health and Health Commissiongzwkj2021-039

在线出版日期：2023-07-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：633-637