丹参酮A通过调节ABCE1抑制缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡和自噬

摘要：

目的:探讨丹参酮ⅡA对缺氧/复氧诱导的H9C2心肌细胞凋亡和自噬的影响及其作用机制。方法:取对数生长期H9C2心肌细胞，将其分为空白对照组、缺氧/复氧模型组及丹参酮ⅡA低、中、高剂量组（分别于制模后给予50、100、200 mg/L丹参酮ⅡA）。选取治疗效果较好的剂量进行后续研究，将细胞分为空白对照组、缺氧/复氧模型组、丹参酮ⅡA+pcDNA3.1-NC组和丹参酮ⅡA+pcDNA3.1-ABCE1组，用过表达质粒pcDNA3.1-ABCE1和pcDNA3.1-NC转染后进行相应处理。采用细胞增殖与毒性检测试剂盒（CCK-8）检测各组H9C2细胞活性；采用流式细胞术检测心肌细胞凋亡率；采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应（RT-qPCR）检测各组H9C2细胞三磷酸腺苷结合盒转运体E1（ABCE1）、凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3（caspase-3）以及自噬相关蛋白Beclin-1、微管相关蛋白轻链3（LC3Ⅱ/Ⅰ）、p62的mRNA表达水平；采用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测各组H9C2细胞上述指标的蛋白表达水平。结果:①细胞活性及ABCE1表达：丹参酮ⅡA可抑制缺氧/复氧诱导的H9C2细胞活性，中剂量即可达到显著效果〔（0.95±0.05）%比（0.37±0.10）%，
P<0.01〕，ABCE1的mRNA和蛋白表达显著降低〔ABCE1 mRNA（2
-ΔΔCt）：2.02±0.13比3.74±0.17，ABCE1蛋白（ABCE1/GAPDH）：0.46±0.04比0.68±0.07，均
P<0.05〕。②凋亡相关蛋白表达：中剂量丹参酮ⅡA可抑制缺氧/复氧诱导的H9C2细胞凋亡〔（28.26±2.52）%比（45.27±3.07）%，
P<0.05〕。与缺氧/复氧模型组比较，中剂量丹参酮ⅡA可明显下调缺氧/复氧诱导的H9C2细胞中Bax和caspase-3的蛋白表达，明显上调Bcl-2的蛋白表达〔Bax（Bax/GAPDH）：0.28±0.03比0.47±0.03，caspase-3（caspase-3/GAPDH）：0.31±0.02比0.44±0.03，Bcl-2（Bcl-2/GAPDH）：0.53±0.02比0.37±0.05，均
P<0.05〕。③自噬相关蛋白表达：与空白对照组比较，缺氧/复氧模型组细胞LC3阳性率明显增加，丹参酮ⅡA中剂量组细胞LC3阳性率则明显减少〔（20.67±3.09）%比（42.67±3.86）%，
P<0.01〕。与缺氧/复氧模型组比较，中剂量丹参酮ⅡA可以明显下调Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ和p62的蛋白表达〔Beclin-1（Beclin-1/GAPDH）：0.27±0.05比0.47±0.03，LC3Ⅱ/Ⅰ比值：0.24±0.05比0.47±0.04，p62（p62/GAPDH）：0.21±0.03比0.48±0.02，均
P<0.05〕。④过表达ABCE1质粒转染后凋亡和自噬相关蛋白表达：与丹参酮ⅡA+pcDNA3.1-NC组比较，丹参酮ⅡA+pcDNA3.1-ABCE1组Bax、caspase-3、Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ和p62的蛋白表达水平均明显上调，Bcl-2的蛋白表达水平明显下调。
结论:100 mg/L的丹参酮ⅡA即可通过调节ABCE1的表达水平抑制心肌细胞自噬和凋亡，从而在缺氧/复氧诱导的H9C2心肌细胞损伤起到保护作用。

关键词：丹参酮ⅡA、缺氧/复氧损伤、H9C2心肌细胞、自噬、凋亡、三磷酸腺苷结合盒转运体E1

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资助基金：河北省承德市科技研究与发展计划项目202006A005;Science and Technology Research and Development Program of Chengde City202006A005

在线出版日期：2023-07-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：627-632