LATS2介导Hippo信号途径调控间充质干细胞生物学行为的实验研究

摘要：

目的 探讨通过大肿瘤抑制因子2(LATS2)介导Hippo信号途径对小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)生物学行为的调控效应.方法 体外培养C57BL/6小鼠BMSCs,传至第6～7代用于实验.采用慢病毒载体转染分别构建高表达或低表达LATS2的BMSCs模型;根据不同转染试剂设置空白对照组(MSC组)、空载体对照组(MSC-eGFP组)、高表达LATS2组(MSC-LATS2组)、空干扰病毒转染组(MSC-shcontrol组)和干扰LATS2病毒转染组(MSC-shLATS2组).采用流式细胞仪检测慢病毒转染效率;采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测LATS2及其下游共转录因子磷酸化Yes相关蛋白(p-YAP)、14-3-3的mRNA与蛋白表达;采用茜素红、油红O染色观察BMSCs成骨、成脂分化情况;采用CCK-8细胞增殖检测试剂盒检测BMSCs数量;采用划痕实验及Transwell迁移实验评估Hippo信号途径对BMSCs水平和垂直迁移能力的影响.结果 慢病毒载体转染效率高达93.1%～97.1%.MSC-LATS2组LATS2、p-YAP、14-3-3表达均较MSC-eGFP组显著增高〔LATS2 mRNA(2-ΔΔCT):2.55±0.13比1.08±0.05,LATS2/GAPDH :2.63±0.11比1.06±0.08,p-YAP/总YAP :1.67±0.11比1.00±0.04,14-3-3/β-actin :2.22±0.20比0.98±0.06,均P＜0.05〕,MSC-shLATS2组均较MSC-shcontrol组显著降低〔LATS2 mRNA(2-ΔΔCT):0.10±0.01比1.01±0.05, LATS2/GAPDH :0.09±0.01比1.05±0.06,p-YAP/总YAP :0.10±0.02比1.10±0.09,14-3-3/β-actin :0.05±0.01比0.90±0.08,均P＜0.05〕,说明高表达及低表达LATS2可以活化或抑制Hippo信号途径.光镜下观察显示, MSC-LATS2组诱导成骨、成脂分化后,钙质沉积及脂质颗粒沉积较MSC-eGFP组显著减少,MSC-shLATS2组均较MSC-shcontrol组显著增加,说明高表达及低表达LATS2可抑制或促进BMSCs成骨、成脂分化.MSC-LATS2组BMSCs增殖率较MSC-eGFP组显著下降,MSC-shLATS2组BMSCs增殖率较MSC-shcontrol组显著增高,说明高表达及低表达LATS2可抑制或促进BMSCs增殖.划痕实验和Transwell迁移实验显示,MSC-LATS2组划痕弥合程度较MSC-eGFP组显著减小〔(22.11±3.02)%比(45.99±6.58)%〕,迁移至Transwell小室膜下层细胞数显著减少(个/中倍视野:20.82±3.05比111.33±13.28,均P＜0.05);MSC-shLATS2组划痕弥合程度较MSC-shcontrol组显著增加〔(70.32±7.17)%比(39.28±2.98)%〕,而迁移至Transwell小室膜下层细胞数显著增加(个/中倍视野:206.19±30.58比120.10±25.10,均P＜0.05),说明高表达及低表达LATS2可抑制或促进BMSCs的水平和垂直迁移能力.结论 通过LATS2可介导Hippo信号途径调控BMSCs的分化、增殖和迁移能力.

关键词：急性呼吸窘迫综合征、大肿瘤抑制因子2、Hippo信号途径、间充质干细胞、生物学行为

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在线出版日期：2019-12-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1143-1148