微小RNA-155可降低脂多糖诱导的肺泡巨噬细胞炎症反应

摘要：

目的 观察调控微小RNA-155(miR-155)对脂多糖(LPS)诱导大鼠肺泡巨噬细胞炎症反应的影响.方法 体外培养大鼠肺泡巨噬细胞NR8383,取处于对数生长期的细胞进行实验.①?以1?mg/L的LPS分别刺激大鼠肺泡巨噬细胞3、6、12、24?h,并设磷酸盐缓冲液(PBS)对照组.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞上清液中炎性因子白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的动态变化,采用实时定量反转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测细胞中miR-155的动态表达,确定LPS刺激的最佳时间为12?h.②?应用羧基荧光素(FAM)荧光标记的模拟物(FAM?mimic)和抑制物(FAM?inhibitor)分别转染肺泡巨噬细胞6?h,倒置荧光显微镜下观察转染效果,确定mimic的最佳转染浓度为20?nmol/L,inhibitor的最佳转染浓度为100?nmol/L.按最佳转染浓度将miR-155?mimic、miR-155?inhibitor分别转染至肺泡巨噬细胞24?h后,给予1?mg/L的LPS刺激细胞12?h,并设mimic阴性对照+LPS组和inhibitor阴性对照+LPS组.采用ELISA法检测细胞上清液中IL-1β、TNF-α的表达,观察miR-155对肺泡巨噬细胞炎症反应的调控作用.结果 ①?用1?mg/L的LPS刺激肺泡巨噬细胞后,细胞上清液中IL-1β、TNF-α含量和细胞中miR-155的表达均随时间延长而呈持续升高趋势,IL-1β和TNF-α含量于12?h达峰值,miR-155表达于24?h达峰值〔与PBS对照组比较,IL-1β(ng/L):910.43±36.09比22.66±7.84,TNF-α(ng/L):3?138.39±394.10比233.92±8.84,miR-155(2-ΔΔCt):7.82±0.30比1,均P＜0.05〕.②?倒置荧光显微镜下显示,采用20?nmol/L?FAM?mimic或100?nmol/L?FAM?inhibitor转染肺泡巨噬细胞6?h后,大量细胞呈现绿色荧光,提示转染成功.采用20?nmol/L?的miR-155?mimic转染细胞24?h后细胞中miR-155表达较其阴性对照组上调了(236.73±46.49)倍(P＜0.05),加入1?mg/L的LPS刺激细胞24?h?后上清液中IL-1β、TNF-α含量较其阴性对照组显著降低〔IL-1β(ng/L):324.37±36.59比799.31±39.44, TNF-α(ng/L):1?554.01±342.48比3?020.49±418.30,均P＜0.05〕;而用100?nmol/L的miR-155?inhibitor转染细胞24?h后细胞中miR-155活性被明显抑制,其表达较其阴性对照组下降了(4.00±3.26)%,但差异无统计学意义(P＞0.05),加入1?mg/L的LPS刺激细胞12?h后细胞上清液中IL-1β、TNF-α含量均较其阴性对照组显著升高〔IL-1β(ng/L):1?358.98±212.04比878.68±53.42,TNF-α(ng/L):4?225.57±281.11比2?881.32±286.08,均P＜0.05〕.结论 在LPS诱导的肺泡巨噬细胞炎症反应中,miR-155能够起到明显的抑制作用.

关键词：微小RNA-155、肺泡巨噬细胞、炎症反应、细胞转染

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资助基金：国家自然科学基金81260288,81560306;江西省卫生计生委科技计划项目20151025 National Natural Science Foundation of China81260288, 81560306;Science and Technology Research Project of Health and Family Planning Commission of Jiangxi Province20151025

在线出版日期：2019-01-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1061-1065