miR-155反义寡核苷酸对内毒素诱导急性肺损伤小鼠的保护作用

摘要：

目的 通过建立微小RNA(miRNA)反义寡核苷酸(ASO)慢病毒表达载体,探讨miR-155 ASO对急性肺损伤(ALI)小鼠的保护作用.方法 设计并合成miR-155 ASO,使用BamHⅠ和NheⅠ双酶切后连接产生慢病毒表达载体,聚合酶链反应(PCR)筛选阳性克隆,测序并测定病毒滴度.按随机数字表法将54只4～6周龄的雄性BALB/c小鼠平均分为3组,均经腹腔注射脂多糖(LPS)10 mg/kg制备ALI动物模型.3组分别于制模前24 h经尾静脉注射含1×108/mL pmiR-155-ASO病毒的磷酸盐缓冲液(PBS)200μL(pmiR-155-ASO组),或含1×108/mL pSMPUW-miR-GFP空载体病毒的PBS 200μL(pmiR-cont组),或等量PBS(PBS组).每组中10只小鼠用于观察7 d存活率;剩余8只小鼠于制模后取血标本及肺组织,用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清炎性因子水平;用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肺组织miR-155表达;镜下观察肺组织病理学改变及巨噬细胞分布.结果 pmiR-cont组与PBS组各指标比较差异均无统计学意义.pmiR-155-ASO组肺组织中miR-155成熟体的表达水平较pmiR-cont组明显降低(2-ΔΔCt:4.92±0.72比15.38±0.60,P<0.05).与pmiR-cont组比较:给予miR-155ASO预处理后ALI小鼠损伤程度明显改善,7 d存活率显著提高(72.1％比61.9％,P<0.05);肺大体观察显示肺组织充血明显减轻,肺湿/干重(W/D)比值明显下降(4.50±0.13比5.64±0.61,P<0.05);苏木素-伊红(HE)染色显示肺组织炎性细胞浸润减少,免疫荧光法检测显示肺组织巨噬细胞浸润数量明显减少;血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)水平明显降低〔TNF-α(ng/L):379.8±48.9比495.9±33.3,IL-6(ng/L):262.3±61.8比355.4±22.6,均P<0.05〕,而IL-10水平无明显改变(ng/L:143.6±32.5比140.4±22.3,P>0.05).结论 miR-155 ASO具有抑制LPS诱导ALI小鼠炎症反应、改善预后的作用.

关键词：急性肺损伤、炎症反应、微小RNA-155、反义寡核苷酸

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资助基金：国家自然科学基金 81370174 National Natural Science Foundation of China 81370174

在线出版日期：2018-10-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：743-747