A2b腺苷受体活化降低脂多糖诱导的肺微血管内皮通透性

摘要：

目的 探讨A2b腺苷受体(Adora2b)在脂多糖(LPS)诱导人肺微血管内皮通透性中的作用及机制.方法 原代培养人肺微血管内皮细胞(HPMECs),进行LPS量效-时效实验及Adora2b激动剂/抑制剂干预实验.① 量效-时效实验:以1、10、100、1 000 μg/L的LPS作用24 h,或以100 μg/L的LPS作用4、8、12、16、24 h后,用细胞毒性实验检测细胞活性,用实时荧光反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测Adora2b表达.② Adora2b激动剂/抑制剂干预实验:将血清饥饿后的HPMECs,用Adora2b激动剂BAY60-6583(0.1、1、10 μmol/L)或Adora2b抑制剂PSB1115(1 μmol/L)预处理1 h,再加入100 μg/L的LPS处理24 h ;同时设立空白对照、LPS、BAY60-6583和PSB1115单独处理组.用异硫氰酸荧光素(FITC)-葡聚糖法检测HPMECs单层通透性,用流式细胞仪测定细胞周期,用RT-PCR检测内皮细胞间连接蛋白和促血管生成因子的表达.结果 ① 量效-时效实验:LPS可诱导HPMECs细胞活性下降,并呈时间-剂量依赖性.与对照组比较,100 μg/L和1 000 μg/L的LPS作用后HPMECs表面Adora2b蛋白表达明显上调;Adora2b mRNA表达呈时间-剂量依赖性增高.② Adora2b激动剂/抑制剂干预实验:与对照组比较,LPS可明显增加HPMECs单层通透性,抑制细胞活性和细胞增殖,降低细胞间连接蛋白和促血管生成因子表达.与LPS组比较,0.1、1、10 μmol/L BAY60-6583预处理可呈剂量依赖性降低HPMECs单层通透性〔通透系数(Pd):(203.06±15.24)%、 (164.15±17.82)%、 (125.69±10.38)%比(218.53±12.05)%〕, 提高细胞活性〔(48.64± 5.05)%、 (59.58±2.71)%、 (94.89±12.17)%比(35.97±5.40)%〕,促进细胞增殖〔S+G2期细胞数:(24.36± 1.40)%、(32.27±0.95)%、 (40.05±2.99)%比(18.83±0.73)%〕;10 μmol/L BAY60-6583预处理还可以上调细胞间连接蛋白的mRNA表达〔钙黏蛋白(VE-cadherin)mRNA(2-ΔΔCt):2.17±0.23比0.56±0.10, 封闭蛋白(occludin)mRNA(2-ΔΔCt):5.32±0.28比0.48±0.11〕,促进促血管生成因子mRNA表达〔血管内皮生长因子(VEGF)mRNA(2-ΔΔCt):4.44±0.34比0.58±0.09,血管生成素1(ANGPT1)mRNA(2-ΔΔCt):5.98±0.73比0.66± 0.10,均P＜0.05〕.PSB1115预处理则可进一步增加HPMECs通透性,降低细胞间连接蛋白表达,加重细胞损伤.BAY60-6583或PSB1115本身对细胞活性、细胞周期分布及促血管生成因子表达均无显著影响.结论在LPS诱导的人肺微血管内皮损伤中,Adora2b表达上调;Adora2b活化通过调节细胞间连接、促进血管生成等机制降低肺微血管内皮屏障通透性.

关键词：急性肺损伤、血管内皮通透性、A2b腺苷受体

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资助基金：北京市自然科学基金7162197;Beijing Municipal Natural Science Foundation7162197

在线出版日期：2018-08-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：588-593