百草枯体外诱导人外周血中性粒细胞胞外诱捕网形成的实验研究

摘要：

目的 探讨百草枯(PQ)能否诱导人外周血中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)的形成.方法 分离健康者外周血中性粒细胞,苏木素-伊红(HE)染色后进行细胞鉴定;分别采用浓度为0(对照)、200、400、600、800、1 000、1 200 μmol/L的PQ溶液处理细胞,建立PQ中毒的体外模型,应用CCK-8细胞增殖和细胞毒性检测试剂盒检测细胞存活率,选择半数致死量的PQ浓度作为实验干预点.根据细胞活性检测结果进行细胞染毒(PQ染毒组),以未染毒细胞作为对照.采用免疫荧光染色显微成像定性鉴定NETs形成情况;采用PicoGreen核酸定量分析试剂盒检测细胞上清中游离DNA含量;采用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测细胞上清中瓜氨酸化组蛋白3 (H3Cit)、髓过氧化物酶(MPO)的蛋白表达.结果 HE染色鉴定中性粒细胞纯度约95％;经不同浓度PQ建立中毒体外模型后发现,PQ浓度为800 μmol/L时细胞存活率为(58±2)％,以该半数致死量作为实验干预点.免疫荧光定性观察显示,对照组中性粒细胞仅有少量H3Cit及MPO表达,无NETs形成;而800 μmol/L PQ可以刺激中性粒细胞产生由DNA、H3Cit和MPO形成的NETs.定量结果显示,与对照组比较,PQ染毒组细胞上清中游离DNA含量显著升高(μg/L:2235±462比561±87,P＜0.01);且PQ染毒组细胞上清中H3Cit和MPO蛋白表达量均较对照组明显升高[H3Cit蛋白表达(灰度值):0.23±0.03比0.11±0.01,MPO蛋白表达(灰度值):0.47±0.05比0.21±0.04,均P＜ 0.05].结论 800 μmol/L的PQ可以诱导人外周血中性粒细胞形成NETs.

关键词：百草枯、中性粒细胞胞外诱捕网、游离DNA、中毒

所属期刊栏目：29

分类号：R97;R65

资助基金：National Natural Science Foundation of China81272071;Shanghai Municipal Natural Science Foundation of China 14ZR1433700国家自然科学基金81272071;上海市自然科学基金14ZR1433700

在线出版日期：2017-05-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：216-220