高迁移率族蛋白B1对人脐静脉内皮细胞增殖及迁移能力的影响

摘要：

目的 探讨高迁移率族蛋白B1 (HMGB1)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖和迁移能力的影响.方法 通过稳定转染的方法将pRNA-u6.1/Neo-对照和pRNA-u6.1/Neo-HMGB1短发夹RNA(shRNA)质粒转至HUVEC细胞,构建对照及HMGB1 shRNA细胞株,通过蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)和实时荧光逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)进行稳定转染细胞的鉴定,通过四甲基偶氮唑盐(MTT)检测细胞株增殖情况,流式细胞仪检测细胞株周期的分布,划痕实验检测细胞株迁移能力.结果 Western blotting及RT-PCR检测证明HMGB1 shRNA稳定转染的HUVEC细胞株构建成功,培养72 h时细胞中HMGB1蛋白及mRNA表达较对照细胞明显降低(蛋白:0.436±0.027比1.017±0.038,T=12.180,P=0.000; mRNA:0.436±0.031比1.020±0.051,T=9.660,P=0.001).MTT结果显示,HMGB1 shRNA稳定转染HUVEC细胞株2、3、4、5d的增殖能力比对照细胞株明显下降(2 d:0.210±0.023比0.240±0.011,T=1.050,P=0.351;3 d:0.240±0.022比0.361±0.030,T=3.203,P=0.033;4 d:0.373±0.031比0.531±0.033,T=3.530,P=0.022;5 d:0.441±0.031比0.602±0.030,T=4.180,P=0.106).流式细胞仪检测结果显示,HMGB1 shRNA细胞株在S期的比例明显低于对照细胞株”(13.10±1.10)％比(21.12±1.20)％,T=4.950,P=0.001”.划痕实验结果显示,HMGB1 shRNA细胞株在细胞刮除后12h划痕愈合的细胞比例较对照细胞株明显降低”(21.07±3.33)％比(88.53±3.15)％,T=14.142,P=0.000”.结论 HMGB1 shRNA能明显抑制HUVEC细胞的增殖和迁移能力.

关键词：人脐静脉内皮细胞、高迁移率族蛋白B1、增殖、迁移

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资助基金：国家自然科学基金30901438,81301619;辽宁省沈阳市科技计划项目F13-220-9-11

在线出版日期：2014-01-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：711-714