真核表达质粒pCMV-脂联素的构建及其转染对高糖环境下肾系膜细胞增殖影响的研究

摘要：

目的 构建pCMV-脂联素(APN)真核表达质粒,观察转染小鼠肾系膜细胞后APN的表达以及对高糖环境下肾系膜细胞增殖的影响. 方法 通过RT-PCR扩增小鼠肾系膜细胞中APN基因片段,经酶切、纯化后与pcDNA3.1质粒连接构建pCMV-APN重组质粒.pCMV-APN重组质粒经酶切鉴定及DNA测序验证后,由脂质体转染将pCMV-APN真核表达质粒转导入肾系膜细胞中,Western blot检测转染后细胞中APN蛋白表达,MTT检测转染后细胞在高糖环境下增殖活性的变化. 结果 真核表达质粒pCMV-APN经酶切、测序鉴定后提示构建成功.转染后肾系膜细胞APN蛋白表达明显增高,且在高糖环境下的增殖活性较空载体转染组明显下降[(0.87±0.06) vs (0.60±0.01),P<0.05]. 结论 成功构建pCMV-APN真核表达质粒,能稳定表达于小鼠肾系膜细胞及抑制高糖的诱导增殖作用,为进一步研究APN的生物学功能奠定理论基础.

关键词：真核表达质粒、pCMV-脂联素、肾系膜细胞、转染、细胞增殖

所属期刊栏目：25

分类号：R73;R97

资助基金：福建省医学创新课题2015-CX-13

在线出版日期：2017-08-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：649-654