猪圆环病毒2d亚型病毒样颗粒的构建和鉴定

摘要：

为了更有效的减轻猪圆环病毒2d亚型(PCV2d)感染对养猪业的影响,本试验利用昆虫细胞-杆状病毒表达系统制备PCV2d病毒样颗粒(VLPs),并进行鉴定.利用无缝克隆技术将PCV2d结构蛋白Cap的全长基因分别克隆至杆状病毒载体pFastBac Dual双启动子两端,构建重组质粒pFB-cap-cap.将pFB-cap-cap质粒转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞并经蓝白斑筛选后得到穿梭质粒rBacmid-cap-cap.将穿梭质粒转染昆虫卵巢细胞Sf9,收获含cap基因的重组杆状病毒rBV-cap-cap,并通过间接免疫荧光试验(IFA)和Western blot鉴定Cap蛋白的表达,电镜观察是否形成VLPs.结果显示,重组质粒pFB-cap-cap经PCR鉴定构建成功,转染后收获的P1代重组杆状病毒rBV-cap-cap经PCR鉴定为阳性.IFA和Western blot鉴定结果显示,Cap蛋白成功在Sf9细胞内表达,且能与PCV2单克隆抗体进行特异性反应.纯化后的Cap蛋白在电镜下观察能够组装成VLPs结构.结果表明,本试验在昆虫细胞-杆状病毒表达系统成功表达PCV2d Cap蛋白,并形成VLPs结构,为预防PCV2d提供参考.

关键词：猪圆环病毒2型、Cap蛋白、病毒样颗粒

所属期刊栏目：59

分类号：S852.651(动物医学（兽医学）)

资助基金：山东省重点研发计划;青岛市科技惠民示范引导专项

在线出版日期：2023-11-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：37-41