油酸钠诱导绵羊原代肝细胞脂肪变性模型的建立
脂肪肝综合征是绵羊的高发病,为了建立绵羊原代肝细胞脂肪变性模型用于研究该病的发病机制,本试验采用改良的两步灌流法分离获取羊原代肝细胞,培养24 h后给予不同浓度油酸钠诱导12 h,采用CCK-8法检测肝细胞活力,酶联免疫吸附法(ELISA)检测谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)含量,油红O染色观察细胞脂滴聚集情况,确定诱导浓度;随后用该浓度油酸钠诱导羊原代肝细胞,确定诱导时间;确定模型构建条件后,采用荧光定量PCR检测模型肝细胞中Toll样受体4(TLR4)、核因子激活的B细胞的κ-轻链增强子(NF-κB)、3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A合成酶2(HMGCS2)、乙酰辅酶A(ACACA)、线粒体三功能蛋白(MTP)共5种脂代谢基因的转录水平.结果显示,与未诱导的空白对照组相比,当油酸钠浓度为0.50 mmol/L时,肝细胞活性显著降低(P＜0.05),ALT、AST含量均显著升高(P＜0.05),肝细胞内出现明显脂肪沉积,且随着油酸钠诱导浓度的升高而增加.用0.50 mmol/L油酸钠诱导时间越长,肝细胞活性越低,ALT、AST含量越高,诱导12 h时油红O染色可见肝细胞出现大量脂肪沉积.因此确定诱导条件为0.50 mmol/L油酸钠诱导12 h.与空白对照组相比,模型组肝细胞中TLR4、NF-κB、MTP和ACACA基因的表达水平显著增高(P＜0.05),HMGCS2基因的表达水平显著降低(P＜0.05).结果表明,在绵羊原代肝细胞培养基中添加0.50 mmol/L油酸钠诱导12 h可建立羊原代肝细胞脂肪变性模型.
油酸钠、绵羊、原代肝细胞、脂肪变性模型
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R363.2(病理学)
洛阳职业技术学院博士科研启动基金10010029
2023-06-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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