诺如病毒和轮状病毒三重荧光定量PCR检测方法的建立

摘要：

为了建立一种能同时检测GⅠ型诺如病毒(GⅠ-NV)、GⅡ型诺如病毒(GⅡ-NV)和A群轮状病毒(A-RV)的三重荧光定量PCR检测方法,本试验根据GⅠ-NV和GⅡ-NV的开放阅读框1(Orfl)与开放阅读框2(Orf2)基因之间保守序列、A-RV的非结构蛋白3(Nsp3)基因保守序列,分别设计合成3对特异性引物和3个TaqMan探针,人工合成含有目标序列的基因,制备重组质粒标准品,绘制标准曲线,并对该检测方法的特异性、灵敏度、重复性进行评估.同时通过检测收集的109份动物源食品样品,对建立的方法与商品化试剂盒进行检测比对.结果显示:该方法可以特异性地区分GⅠ-NV、GⅡ-NV和A-RV,而与其他病原无交叉反应;该方法的最低检出限均为1×102copies/μL的质粒标准品,具有较高的敏感性;组内和组间重复性试验结果显示,变异系数均小于5％,重复性较好;该方法与商品化的试剂盒检测结果符合率为100％.结果表明,本试验建立的检测方法能够快速、准确区分GⅠ-NV、GⅡ-NV和A-RV.

关键词：诺如病毒、轮状病毒、三重荧光定量PCR、标准曲线、动物源食品

所属期刊栏目：58

分类号：S851.4(动物医学（兽医学）)

资助基金：四川省科技厅科技创新创业苗子工程重点项目2019JDRC0073

在线出版日期：2022-10-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：49-54,58