非洲猪瘟病毒A104R蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备与鉴定

摘要：

为制备非洲猪瘟病毒(ASFV)重组蛋白A104R(rA104R)及研制抗rA104R的多克隆抗体,本研究通过ExPASy等在线生物信息学软件初步预测该蛋白的理化性质、信号肽、核定位信号等信息,继而合成ASFV的A104R基因,构建基于pET-28a(+)载体的原核表达系统.重组蛋白用Ni亲和层析纯化后,经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、Western blotting和液相色谱-质谱联用(LC-MS)技术鉴定.纯化的蛋白免疫6-8周龄BALB/c小鼠,制备抗rA104R的多克隆抗体,通过West-ern blotting 和间接酶联免疫吸附试验(ELISA)鉴定其反应性和免疫原性.结果显示,原核表达载体构建成功;重组菌在37℃诱导8 h后表达量最高,在包涵体和上清中均有表达,表明其呈部分可溶性表达;纯化的重组蛋白大小约16 kDa,且反应性良好;LC-MS分析结果显示,该rA104R蛋白多个肽段均与目标蛋白的氨基酸序列相匹配,匹配率为59％;制备的鼠源抗rA104R多克隆抗体效价大于1∶2 048 000,具有良好的免疫原性.结果表明,本研究制备的rA104R及其多克隆抗体可进一步用于生物学功能研究,并可为疫苗及相关诊断试剂研制提供基础材料.

关键词：非洲猪瘟病毒、原核表达、A104R重组蛋白、液相色谱-质谱

所属期刊栏目：58

分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家重点研发课题2018YFC0840400

在线出版日期：2022-09-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：29-34