真核重组荧光质粒pEGFP-N1-Et HP的构建及高效转染细胞的筛选

摘要：

为了构建真核重组荧光质粒pEGFP-N1-Et HP,并筛选出Lipofectamine 2000介导的高效转染细胞,本试验将柔嫩艾美尔球虫假定蛋白(Et HP)基因扩增后插入真核荧光表达载体pEGFP-N1,构建真核重组荧光质粒pEGFP-N1-Et HP;测序成功后,用 Lipofectamine 2000 介导 pEGFP-N1-Et HP 转染 4 种细胞即 Vero、DF-1、BHK、HD-11;用 Western blot 检测确定 Et HP蛋白在4种细胞内的表达,并观察转染48 h后荧光表达情况,计算5个视野内带有绿色荧光的细胞数占细胞总数的比例,从而比较质粒与Lipofectamine 2000比例不同时4种细胞的转染效率[转染效率/％=(带有绿色荧光的细胞数/细胞总数)×100％].测序结果显示,pEGFP-N1-Et HP构建成功.Western blot检测显示,EtHP蛋白在4种细胞中均成功表达;荧光显微镜观察到4种细胞转染后48 h均出现绿色荧光,表明重组质粒pEGFP-N1-Et HP成功表达.通过转染效率的比较,发现DF-1细胞转染效率均显著高于其他细胞(P＜0.05);当质粒与Lipofectamine 2000比例为1∶ 2时,DF-1细胞转染效率最高.因此,重组质粒pEGFP-N1-Et HP可高效转染DF-1细胞.本试验结果为进一步探索Et HP蛋白在柔嫩艾美尔球虫入侵寄生过程中的生物学功能提供有效的试验工具.

关键词：柔嫩艾美尔球虫假定蛋白、真核重组荧光质粒、DF-1细胞、转染效率

所属期刊栏目：58

分类号：S855.9(动物医学（兽医学）)

资助基金：北京市特色高水平骨干专业群项目;北京农业职业学院院级科研项目

在线出版日期：2022-07-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：45-48,55