猪捷申病毒TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立和初步应用

摘要：

为建立猪捷申病毒(PTV)的TaqMan实时荧光定量RT-PCR(RT-qPCR)检测方法,在PTV基因组序列保守区设计引物和TaqMan探针,构建重组质粒作为阳性标准品,通过优化反应条件,建立了检测PTV的RT-qPCR方法,并进行特异性、敏感性和重复性试验.结果表明,该方法仅对PTV出现特异性扩增反应,与猪流行性腹泻病毒、猪丁型冠状病毒、猪传染性胃肠炎病毒、A群猪轮状病毒等常见猪病毒均无交叉反应.该方法的标准曲线Ct值与4.6×108～4.6×102拷贝/μL的质粒浓度范围具有良好线性关系,标准曲线方程为Ct=-3.201 x logX+40.527,线性相关系数(R2)为0.996,检测下限为4.6 x 101拷贝/μL.对不同浓度的pMD18-PTV进行组内与组间重复检测,每个浓度重复试验的Ct值的变异系数均小于4.0％,具有良好的重现性.应用所建立的方法对235份临床猪腹泻样品进行检测,PTV阳性样品32份,样品阳性率为13.62％.本试验建立的RT-qPCR方法为PTV实验室检测及病毒研究分析提供了可靠的技术手段.

关键词：猪捷申病毒、荧光定量RT-PCR、TaqMan探针

所属期刊栏目：56

分类号：S852.65+1(动物医学（兽医学）)

资助基金：广西创新驱动发展专项资金项目;广西基本科研业务费专项;广西自然科学基金项目;广西兽医生物技术重点实验室开放基金课题;广西柳州市科技计划

在线出版日期：2021-05-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：37-42,46