BVDV和IBRV双重实时荧光定量PCR检测方法建立

摘要：

根据牛病毒性腹泻病毒(BVDV)5’端非编码区和牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)gB基因保守区基因序列,参考文献分别合成了2对特异性引物和探针.利用构建的包含BVDV和IBRV目标基因片段的阳性质粒,对退火温度、引物和探针的浓度以及反应条件进行了优化,构建了实时荧光定量PCR(qPCR)标准曲线,并对双重qPCR方法的特异性、敏感性和重复性进行了评价.试验结果显示,qPCR最适退火温度为54.0℃,BVDV引物浓度为0.2μmol/L,IBRV引物浓度为0.3 μmol/L,BVDV探针浓度0.2 μmol/L,IBRV探针浓度为0.1 μmol/L.BVDV的RNA最低检测限为100拷贝/μL,IBRV的DNA最低检测限为1拷贝/μL,并具有良好的特异性和重复性,为BVDV和IBRV的同时、快速、定量检测提供了有效的方法.

关键词：BVDV、IBRV、实时荧光定量PCR(qPCR):探针

所属期刊栏目：55

分类号：S858.23(动物医学（兽医学）)

资助基金：现代农业奶牛产业技术体系建设专项CARS-36

在线出版日期：2020-06-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：28-31,36,中插3