虾肝肠胞虫LAMP检测技术的建立与应用

摘要：

本试验根据虾肝肠胞虫(Enterocytozoon hepatopenaei,EHP)18S的保守序列设计4套环介导等温扩增(LAMP)引物,从中筛选出一套引物对LAMP反应体系(BstDNA聚合酶浓度、内外引物浓度比、dNTP浓度、Mg2+浓度)和反应条件(温度)进行优化.并对优化后的LAMP反应体系和条件进行特异性、灵敏度及精密度验证.特异性试验表明,该方法能特异性检测虾肝肠胞虫,而与其他病害的核酸没有交叉反应;灵敏度试验表明,可检测浓度为10 fg/μL的质粒DNA,制作的标准曲线可对虾肝肠胞虫进行定量分析.重复性试验结果表明,该方法Ct值的变异系数为2.88％～ 3.02％,具有良好的稳定性.而对于人工侵染的虾肝肠胞虫样品,LAMP方法可检测低至0.44 pg/μL.应用建立的LAMP方法对3个不同地区的120份凡纳滨对虾样品进行检测,检测结果表明,EHP阳性样品数为43,与qPCR检测结果符合率达97％.本试验所建立的LAMP方法具有特异性好、灵敏度高、重复性好的特点,并能在30 min内完成样品的检测,是快速、定量检测虾肝肠胞虫的有效手段.

关键词：虾肝肠胞虫、环介导等温扩增(LAMP)、18S、qPCR

所属期刊栏目：55

分类号：S852.723(动物医学（兽医学）)

资助基金：广东检验检疫局项目2017GDK04

在线出版日期：2020-03-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：26-29,33,封2