OEPR法构建含不同破伤风毒素T细胞表位的CPB表达质粒及其产物的初步鉴定

摘要：

为了提高产气荚膜梭菌β毒素(CPB)亚单位疫苗的免疫效果,试验将不同破伤风毒素辅助性T细胞表位引入该蛋白前,用OEPR (Overlap Extension PCR and Recombination)法构建了8个重组表达质粒(即pCold-CPB、pCold-P2-CPB、pCold-P21-P30-P2-CPB、pCold-P32-P23-P21-P30-P2-CPB和pET22b-CPB、pET22b-P2-CPB、pET22b-P21-P30-P2-CPB、pET22b-P32-P23-P21-P30-P2-CPB).将阳性重组质粒转入到大肠杆菌中,以自诱导培养基表达目的蛋白.SDS-PAGE分析结果表明,8个重组菌均成功表达出目的蛋白,且大小均与预期一致.Western Blotting检测结果表明,重组蛋白均可被C型产气荚膜梭菌阳性血清识别.毒性试验结果表明,重组蛋白均可致死小鼠.本研究首次用OEPR法成功构建了8个含不同破伤风毒素T细胞表位的产气荚膜梭菌β毒素表达质粒,并成功表达了目的蛋白,为探索破伤风毒素辅助性T细胞表位对产气荚膜梭菌β毒素免疫效果的影响及进一步开发亚单位疫苗奠定了基础.

关键词：产气荚膜梭菌β毒素、破伤风毒素T细胞表位、OEPR法

所属期刊栏目：54

分类号：Q939.91(微生物学)

资助基金：国家重点研发计划“牛羊重要细菌病新型疫苗及其工艺研究2017YFD0500905”

在线出版日期：2018-12-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：33-38,中插4