靶向HP-PRRSV ORF7基因siRNA体外抑制HP-PRRSV HN1株复制研究

摘要：

为了体外评价靶向高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV) ORF7的siRNA对HP-PRRSV复制的抑制效果.将3μg siRNA重组质粒载体pSilencer-N2转染于Marc-145细胞中,24 h后再分别接种0.01 MOI PRRSV,感染病毒48 h后,观察其抑制HP-PRRSV HN1株复制效果;待细胞感染病毒72 h后,应用间接免疫荧光试验(IFA)、实时荧光定量PCR及Western Blot检测siRNA重组质粒对HP-PRRSV在细胞中复制的抑制作用.体外结果显示,在最佳接毒量0.01 MOI和最佳接毒时间24 h时,siRNA重组表达质粒在HP-PRRSV感染后48 h能明显抑制病毒的复制,与对照组相比,病毒滴度降低了2个多数量级,抑制达到100～1 000倍.有效干扰持续时间,检测结果表明,与对照组相比,siRNA重组质粒显著抑制HP-PRRSV的增殖,推迟CPE的发生时间,其抑制作用可以持续到感染后的4天.为高致病性猪繁殖与呼吸综合征防控提供有力的物质支持.

关键词：HP-PRRSV、RNA干扰、siRNA

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分类号：S852.61(动物医学（兽医学）)

资助基金：河南省基础与前沿技术研究项目15230041010;河南牧业经济学院预防兽医学重点学科MXK2016102

在线出版日期：2018-11-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：25-28,中插1