病毒性出血性败血症病毒RNA标准物质的研制

摘要：

利用基因克隆和体外转录技术制备病毒性出血性败血症病毒(VHSV)核酸检测标准物质.设计VHSV N基因的克隆引物,RT-PCR获得相应片段,连接至pGEM-T载体,测序后采用体外转录方法制备RNA纯品.初步定量稀释后,混合分装作为核酸标准物质候选物.采用核酸浓度测定与拷贝数换算的方法对转录的RNA片段进行定值.通过绘制荧光定量标准扩增曲线计算标准物质含量(拷贝数),并根据委托单位的定值结果进行不确定度的估算.均一性结果显示瓶间差异小于5％,稳定性试验表明室温20℃～ 25℃(相对湿度20％～ 25％)7d,2℃～8℃保存1个月及-20℃保存6个月的含量均无明显变化.核酸标准物质定值为(6.625 ±0.149)×108 copies/μL,可用作VHSV核酸检测的标准质控品.

关键词：病毒性出血性败血症、实时定量RT-PCR、标准物质

所属期刊栏目：54

分类号：S855.3(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家质检总局科技项目2016IK047

在线出版日期：2018-07-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：15-19