小反刍兽疫病毒P蛋白及非结构蛋白V表达特性研究

摘要：

从小反刍兽疫病毒全长cDNA中对磷酸化蛋白P及其编码的非结构蛋白V基因进行特异扩增,PCR产物回收后分别连接于T载体酶切及测序分析后,将其亚克隆至真核载体pEGFP-N2及原核表达载体pET32a,获得的真核表达质料命名为pEGFP-P、pEGFP-RV与空载体对照转染Vero细胞,经浓度为800 μg/μL G418筛选后获得均一表达,荧光定位观察表明P蛋白与V蛋白的表达并不相同,P蛋白严格定位于细胞浆,而V蛋白则能在胞浆及胞核内观察到;获得原核表达质粒pET32a-P和pET32a-RV在37℃通过条件优化后以1.0 mmol/L IPTG诱导后分别收获细胞上清及沉淀用于SDS-PAGE及Western Blot对重组P、V蛋白的检测,结果表明,重组P蛋白为90 ku,重组V蛋白为55 ku的可溶性融合蛋白,可溶性表达产物经500 mmol/L咪唑两次纯化后获得80％以上纯度的表达,纯化得到的蛋白免疫兔子后能产生特异性抗体.

关键词：小反刍兽疫病毒、P/V蛋白、细胞定位、原核表达

所属期刊栏目：53

分类号：S855.3(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金项目31160499

在线出版日期：2018-07-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：3-6,中插1