猪圆环病毒2型重组腺病毒核酸扩增检测标准样品的研制

摘要：

为研制用于猪圆环病毒2型(PCV-2)核酸扩增检测(NAT)质量控制的标准样品,本研究将猪圆环病毒2型QD/2014株ORF2连接到缺陷型腺病毒穿梭质粒pacAd5 CMV K-NpA上,构建了重组穿梭质粒CMV-PCV-2-ORF2.将其与骨架质粒pacAd5 9.2-100线性化后共转染HEK293T细胞,经胞内重组获得了内含PCV-2-ORF2的重组腺病毒pacAd5 CMV-ORF2.采用PCR和基因测序方法对重组病毒鉴定后进行大量培养、分装和冻干,经均匀性和稳定性检验后对其进行了定值.结果表明,制备的标准样品均匀、稳定,PCV-2-ORF2基因含量为8.17×109 GEq/mL,在HEK293细胞上的TCID50为3.56×107/0.05 mL.本标准样品的研制成功为核酸检测标准物质制备开辟了一条新途径.

关键词：猪圆环病毒2型、ORF2、重组腺病毒、标准样品

所属期刊栏目：51

分类号：S852.65+1(动物医学（兽医学）)

资助基金：质检公益性行业科研专项“动物疫病核酸标准物质制备关键技术研究”201310253

在线出版日期：2016-04-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：10-12,16,中插1