H9N2亚型禽流感病毒三重RT-PCR诊断技术的建立与应用

摘要：

为建立H9N2亚型禽流感病毒三重RT-PCR诊断技术,参考GenBank登录的H9N2亚型禽流感病毒(AIV)的HA、NA、M基因序列,利用Primer Premier5.0软件设计3对可扩增HA、NA、M基因的特异性引物以及反转录引物.3对引物扩增的cDNA片段大小分别为1 742、1 410、1 027 bp.结果:通过对多重RT-PCR扩增条件的优化,建立了H9N2亚型禽流感病毒三重RT-PCR诊断技术,与目的片段大小相符的片段,经测序均正确,且与其他常见禽病病原不存在交叉反应.该方法对HA基因的最低检出量为10-2 μg/μL cDNA,对NA基因的最低检出量为10-2μg/μL cDNA,对M基因的最低检出量为10-3 μg/μL cDNA.通过对30份H9N2阳性病毒液进行三重PCR,均可同时扩出HA、NA、M基因.结果表明,本试验建立了H9N2亚型禽流感病毒三重RT-PCR诊断技术,为提高H9N2亚型禽流感病毒HA、NA、M基因序列分析的效率奠定基础.

关键词：H9N2亚型禽流感、HA基因、NA基因、M基因、多重RT-PCR

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分类号：S855.3(动物医学（兽医学）)

资助基金：山东省现代农业产业技术体系家禽创新团队建设项目SDAIT-13-011-03;国家自然科学基金31272535

在线出版日期：2015-03-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：16-19