线粒体DNA缺失质粒pMDD-Z的构建及鉴定

摘要：

分别以pEGFP-Mito和pAN4质粒为模板,扩增出MTS-EGFP和EcoR Ⅰ基因片段,利用快速体外基因重组技术-重组PCR,将两者连接得到MTS-EGFP-EcoR Ⅰ片段,构建克隆载体pTRE2hyg-EE,经Age Ⅰ和Not Ⅰ双酶切得到MTS-EG-FP-EcoR Ⅰ融合基因产物,连接克隆于真核表达质粒pEGFP-Mito后获得pMDD-Z质粒.琼脂糖凝胶电泳结果显示,MTS-EGFP和EcoR Ⅰ基因片段大小分别是831 bp和860 bp.测序结果显示,插入pTRE2hyg-EE克隆载体中的MTS-EGFP-EcoR Ⅰ片段大小1 672 bp,且基因序列正确,没发生点突变.琼脂糖凝胶电泳结果显示,pMDD-Z质粒的双酶切产物分别为1 587 bp的插入片段和4 024 bp的载体片段.测序结果显示,pMDD-Z质粒中含1 659 bp的开放阅读框,编码553个氨基酸,从N端至C端,分别为线粒体信号导肽、绿色荧光蛋白和限制性内切酶EcoR Ⅰ,且未发生移码突变.

关键词：线粒体DNA、Rho0细胞、克隆、重组PCR、质粒构建

所属期刊栏目：50

分类号：S852.23(动物医学（兽医学）)

在线出版日期：2014-04-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：14-17