脂质体介导抗乙脑病毒载体转染猪胎儿成纤维细胞条件的优化

摘要：

本试验旨在探索脂质体Lipofectamine TM2000介导抗猪乙脑病毒(Anti-JEV)载体转染猪胎儿成纤维细胞(PFF)的最适条件,为构建Anti-JEV转基因胚胎提供供核细胞.从妊娠大白母猪获取10～15 cm猪胎儿,采集背部皮肤用于组织块法培养分离PFF.结果显示,细胞培养至P7代,生长曲线正常；P5-7代细胞用于抗猪乙脑病毒载体转染,当质粒DNA量设定为0.35、0.7、1.05 μg和1.4 μg时,转染率分别为12.75％、36.82％、24.12％和8.85％；当脂质体量设定为0.7、1.4、2.1、2.8 μL和3.5 μL时,转染率分别为13.08％、21.71％、37.15％、24.21％和9.21％；当转染时间设定为2.5、4.5、6.5h和8.5h时,转染率分别为3.97％、38.48％、17.54％和12.47％.这些结果表明,2.1μL脂质体介导0.7 μg质粒DNA转染4.5h转染效率最高.

关键词：抗乙脑病毒载体、猪胎儿成纤维细胞、脂质体、转染

所属期刊栏目：49

分类号：S852.65+9.6(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家转基因生物新品种培育重大专项课题2009ZX-08006-007B

在线出版日期：2013-06-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：9-11,14,中插1