牛结核分枝杆菌MPB70基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

摘要：

以牛分枝杆菌DNA为模板,克隆了牛分枝杆菌MPB70基因,构建了克隆载体pGEM-MPB70和表达载体pET30a-MPB70,经IPTG诱导在大肠杆菌BL-21中表达,用SDS-PAGE和免疫印迹分析表达产物并进行蛋白纯化.试验结果表明,牛分枝杆菌MPB70基因体外扩增产物与预期值相符,约582 bp;所构建表达质粒pET30a-MPB70经测序,结果与预期一致;SDS-PAGE分析表明,该融合蛋白以包涵体的形式表达,其分子质量约为29 kD,蛋白表达量约占菌体总蛋白的20%;该蛋白经电洗脱纯化后,纯度达85%以上;免疫印迹分析表明,原核表达的融合蛋白可与兔抗牛分枝杆菌多克隆抗体结合,并且具特异的免疫反应性.

关键词：牛分枝杆菌、MPB70基因、克隆、原核表达、免疫印迹、蛋白纯化

所属期刊栏目：46

分类号：S852.61+8(动物医学（兽医学）)

资助基金：科技部朊病毒类资源标准化整理整合及共享项目2005KDA21205-7;天津市科委牛结核ELISA诊断试剂盒的应用项目0604220;科技部国家科技支撑计划2008BAI54B06

在线出版日期：2010-07-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：3-5