猪圆环病毒2型ORF2重组蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

摘要：

利用已构建的基因工程重组菌BL21(DE3)表达猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2编码的结构蛋白,经切胶纯化后作为免疫原.采取抗原量依次递增的免疫方式免疫8周龄BALB/c小鼠,取其脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合.间接酶联免疫吸附试验(ELISA)筛选,有限稀释法进行亚克隆3次,最终获得4株稳定分泌抗PCV2 ORF2重组蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别命名为D2A1、H4G2、B10H10和G1G2.经ELISA检测,其腹水效价分别达到1∶2.048×107、1∶2.56×106、1 ∶1.28×106、1∶2.56×106.亚型鉴定4株单克隆抗体均属IgG2a亚型,其轻链均为κ链.Western blot鉴定表明获得的4株单克隆抗体均能特异性的识别43 kD的重组PCV2 ORF2蛋白.在间接免疫荧光试验中,单抗D2A1株的反应为阴性,H4G2、B10H10和G1G2反应为阳性,表明后3株单抗能够识别天然的PCV2 ORF2蛋白表位.本试验为进一步研究PCV2ORF2基因的功能及建立快速准确的诊断PCV2的方法奠定了基础.

关键词：猪圆环病毒2型、融合蛋白、单克隆抗体

所属期刊栏目：43

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金30400321

在线出版日期：2008-01-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：9-11