Ezrin影响胶质瘤在裸鼠脑内的浸润性生长

摘要：

目的 应用RNAi沉默Ezrin基因或表达载体使其过表达以探讨Ezrin基因对脑胶质瘤生长的影响.方法 根据GenBank中Ezrin的基因序列,应用Designer3.0(Genepharma)软件设计以Ezrin基因4个位点为靶的shRNA DNA oligo,合成并克隆至shRNA载体pGPU6/GFP/Neo;构建其shRNA载体.经BamHⅠ、PstⅠ酶切鉴定和测序分析,再以脂质体LipofectimineTM2000介导转染U87细胞,48 h后用RT-PCR和Western blot检测Ezrin mRNA和蛋白的表达,以筛选有效shRNA载体.将转染Ezrin基因有效shRNA载体和表达载体的U87细胞接种裸鼠脑,制备脑瘤动物模型,激光共聚焦显微镜下观察U87细胞在裸鼠脑内的迁移情况.结果 经限制性内切酶切和测序鉴定分析所构建的shRNA-Ezrin正确;RT-PCR和Western blot检测结果表明,shRNA-Ezrin-2可沉默Ezrin表达,使其mRNA和蛋白表达量降低,确定为有效shRNA载体.激光共聚焦显微镜下可见shRNA-Ezrin-2转染的U87细胞在裸鼠脑内迁移数少于对照组,pEGFP-C1/Ezrin转染的U87细胞的迁移数相对较多.结论 成功构建Ezrin基因的shRNA载体并筛选出有效shRNA载体.Ezrin 基因参与U87细胞在裸鼠脑内的浸润性生长.

关键词：脑胶质瘤、Ezrin基因、浸润、RNA干扰、shRNA

所属期刊栏目：17

分类号：Q784(基因工程（遗传工程）)

在线出版日期：2013-04-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：232-236