GRIM-19及其截断体原核表达载体的构建及表达与纯化

摘要：

目的 构建GRIM-19及其截断体原核表达载体,在大肠杆菌中诱导表达并纯化融合蛋白.方法 用RT-PCR法从HeLa细胞中扩增出带BamHⅠ、XhoⅠ酶切位点的GRIM-19及其截断体基因片段,将GRIM-19及其截断体基因片段克隆到pGEX-4T-3原核表达载体上,在大肠杆菌中诱导表达GST-GRIM-19及其截断体融合蛋白,用Glutathione Sepharose 4B纯化,纯化后蛋白经Western-blot鉴定.结果 pGEX-4T-3-GRIM-19及其截断体原核表达载体构建正确,并在大肠杆菌中成功诱导表达,IPTG 诱导以浓度0.5mM,时间2h为宜,且通过Glutathione Sepharose 4B成功纯化到融合蛋白.结论 成功构建GRIM-19及其截断体原核表达载体,诱导表达并纯化GST-GRIM-19及其截断体融合蛋白.

关键词：GRIM-19、诱导表达、纯化

所属期刊栏目：16

分类号：R730.231(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金资助81072127、81001168

在线出版日期：2012-03-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：191-194