重组Kinectin蛋白的表达、纯化及应用研究

摘要：

目的 优化重组kinectin蛋白的诱导表达及纯化条件;探讨用其致敏的树突状细胞(DC)对自体T淋巴细胞增殖能力的影响.方法 以pMAL-C2为载体构建重组质粒,并转入TB1宿主菌.从IPTG加入时机、诱导温度、诱导时间及IPTG浓度方面对工程菌的诱导条件进行优化;过Amylose-resin亲和层析柱对诱导产物进行分离纯化.用获取的MBP-kinectin融合蛋白致敏从人外周血中分离培养的DC,并用ELISA检测细胞上清液中的IL-12、IFN-γ含量;再用MTT法检测致敏DC刺激自体T淋巴细胞增殖的能力.结果 工程菌在37℃振荡培养2个小时后加入终浓度为0.5 mmol/L的IPTG,降低温度到34℃继续诱导3个小时,可明显提高诱导效率;所得MBP-kinectin与DC共培养上清液中IL-12、IFN-γ含量分别为(615.32±7.93)pg/ml,(544.28±7.17)pg/ml,用其刺激的T淋巴细胞增殖指数为53.14±0.62,均高于麦芽糖结合蛋白(MBP)组和空白对照组,且差异有统计学意义.结论 pMAL-C2载体可用于构建kinectin重组质粒;通过对诱导条件的优化,可获得较高的诱导效率;所得MBP-kinectin融合蛋白能致敏DC并具有很强的刺激自体T淋巴细胞增殖的能力.

关键词：肿瘤相关抗原、kinectin、重组蛋白、诱导、树突状细胞

所属期刊栏目：16

分类号：Q786;Q789(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金81160264,81060168;广西自然科学基金重点项目2010GXNSFD013048

在线出版日期：2012-02-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

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