含鼠LINGO-1 shRNA重组腺病毒载体的构建和鉴定

摘要：

目的 构建含鼠LINGO-1短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)的复制缺陷型腺病毒载体.方法 通过PCR法将带有LINGO-1 shRNA序列构建至U6启动子(U6sh LINGO-1)下游,与T载体连接,将质粒转化入大肠杆菌.将U6sh LINGO-1连到穿梭质粒pDC316上,与腺病毒基因组质粒pBHGlox△E1、3Cre共转染293T细胞,得到重组腺病毒载体(rAd LINGO-1).经PCR鉴定正确后,进行扩增、纯化、滴度测定及感染性鉴定.结果 PCR法得到U6sh LINGO-1,rAd LINGO-1具有良好的感染性,腺病毒滴度可达109TCID50/ml.双引物PCR法鉴定Ad LINGO-1可扩增出Ad及特异性片段U6sh LINGO-1.结论 成功构建了能表达LINGO-1 shRNA的重组腺病毒载体rAd LINGO-1,可能为临床应用RNA干涉技术促进脊髓损伤的恢复提供新的方法.

关键词：LINGO-1、腺病毒载体、RNA干扰、脊髓损伤、基因治疗

所属期刊栏目：13

分类号：R373(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

在线出版日期：2010-01-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：1491-1493