抗人肝癌相关基因LAPTM4β胞内肽段单克隆抗体的制备与鉴定及其表达的检测

摘要：

目的 制备和鉴定鼠抗人肝癌相关基因溶酶体相关四次跨膜蛋白β胞内99个氨基酸残基(LAPTM4β-IC-N1-99)的单克隆抗体,检测LAPTM4β在肝癌中的表达,为深入研究其结构和功能奠定基础.方法 利用本实验室构建原核表达质粒pGEX-KG-LAPTM4β-IC-N1-99,在大肠杆菌中表达融合蛋白GST-LAPTM4β-IC-N1-99.用纯化的蛋白LAPTM4β-IC-N1-99免疫雌性BALB/C小鼠,以常规杂交瘤技术制备鼠抗人LAPTM4β-IC-N1-99单克隆抗体(LAPTM4β-IC-N1-99 McAb).进行抗体亚类测定和免疫印迹法(WB)分析,然后用免疫化学技术检测LAPTM4β-IC-N1-99在肿瘤中的表达.结果 诱导并纯化了重组GST-LAPTM4β-IC-N1-99蛋白,其相对分子质量约为32000;纯化得到LAPTM4β-IC-N1-99蛋白,其相对分子量约为10000.筛选出6株能稳定分泌抗LAPTM4β-IC-N1-99单克隆抗体的杂交瘤细胞株(D7,B12,H2,H8,A9 和 A10),D7、H8、A10分泌抗体亚类为IgG1,B12、A9、H2为IgG2b.Western blotting鉴定显示,抗LAPTM4β-IC-N1-99单抗可与融合蛋白及细胞内LAPTM4β蛋白特异性结合,具有高度特异性.免疫细胞化学证明,所得抗体能检测到肿瘤细胞中LAPTM4β基因的表达.结论 以纯化的LAPTM4β-IC-N1-99蛋白免疫,获得了效价高、特异性好的LAPTM4β-IC-N1-99蛋白的单克隆抗体,用其可检测到LAPTM4β肿瘤细胞中的表达,这为LAPTM4β蛋白的生物学功能研究奠定了基础.

关键词：单克隆抗体、LAPTM4β、肝细胞癌、杂交瘤

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分类号：R735.7(肿瘤学)

资助基金：国家863高技术研究项目课题编号:2006AA02A402,2006AA02Z4AB北京市自然科学基金重点项目N0.7041003;面上项目N0.5072016

在线出版日期：2009-08-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：853-857