lncRNA HOTAIR调节miR-326/NUS1轴对宫腔粘连子宫内膜基质细胞纤维化的影响

摘要：

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)同源框转录反义RNA(HOTAIR)调控miR-326/NUS1对宫腔粘连(IUA)子宫内膜基质细胞纤维化的影响.方法 收集首次确诊为IUA的18例患者的子宫内膜组织,另取同期因不孕症接受宫腔镜子宫内膜活检的18例患者的子宫内膜组织作为对照.采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)、western blot分别检测IUA子宫内膜组织、正常子宫内膜组织、人子宫内膜间质细胞(HESC细胞)、IUA HES细胞[转化生长因子-β1(TGF-β1)处理HESC细胞48 h]中HOTAIR、miR-326及NUS1蛋白表达;将IUA HESC细胞分组为Ct组、pcDNA组、pcDNA-HOTAIR组、si-NC组、si-HOTAIR组、si-HOTAIR+inhibitor NC组、si-HOTAIR+miR-326 inhibitor组,采用qRT-PCR检测组织和细胞中HOTAIR、miR-326表达;CCK-8法检测IUA HESC细胞增殖;流式细胞术检测IUA HESC细胞凋亡;western blot检测组织和细胞中NUS1、Ⅰ型胶原蛋白α1链(COL1A1)、纤连蛋白(FN)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验验证HOTAIR与miR-326、miR-326与NUS1的关系;RNA pull down实验验证HOTAIR与miR-326的关系.结果 IUA子宫内膜组织中HOTAIR、NUS1/甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)表达水平高于正常子宫内膜组织,miR-326表达水平低于正常子宫内膜组织,差异具有统计学意义(P<0.05).IUA HESC细胞中HOTAIR、NUS1/GAPDH表达水平高于HESC细胞,miR-326表达水平低于HESC细胞,差异具有统计学意义(P<0.05).pcDNA-HOTAIR组HOTAIR、NUS1/GAPDH表达水平高于Ct组、pcDNA组,miR-326表达水平低于Ct组、pcDNA组,差异具有统计学意义(P<0.05);si-HOTAIR组HOTAIR、NUS1/GAPDH表达水平低于Ct组、si-NC组,miR-326表达水平高于Ct组、si-NC组,差异具有统计学意义(P<0.05);si-HOTAIR组、si-HOTAIR+inhibitor NC组及si-HOTAIR+miR-326 inhibitor组HOTAIR表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);si-HOTAIR+miR-326 inhibitor组miR-326表达水平低于si-HOTAIR组、si-HOTAIR+inhibitor NC组,NUS1/GAPDH表达水平高于si-HOTAIR组、si-HOTAIR+inhibitor NC组,差异具有统计学意义(P<0.05).Ct组IUA HESC细胞450 nm处的光密度(OD450)值为(1.01±0.10),pcDNA组为(1.03±0.12),pcDNA-HOTAIR组为(1.67±0.13),si-NC组为(1.02±0.11),si-HOTAIR组为(0.33±0.03),si-HOTAIR+inhibitor NC组为(0.32±0.02),si-HOTAIR+miR-326 inhibitor组为(0.81±0.08).pcDNA-HOTAIR组IUA HESC细胞OD450值高于Ct组、pcDNA组,差异具有统计学意义(P<0.05);si-HOTAIR组IUA HESC细胞OD450值低于Ct组、si-NC组,差异具有统计学意义(P<0.05);si-HOTAIR+miR-326 inhibitor组IUA HESC细胞OD450值高于si-HOTAIR组、si-HOTAIR+inhibitor NC组,差异具有统计学意义(P<0.05).pcDNA-HOTAIR组IUA HESC细胞凋亡率低于Ct组、pcDNA组,差异具有统计学意义(P<0.05);si-HOTAIR组IUA HESC细胞凋亡率高于Ct组、si-NC组,差异具有统计学意义(P<0.05);si-HOTAIR+miR-326 inhibitor组IUA HESC细胞凋亡率低于si-HOTAIR组、si-HOTAIR+inhibitor NC组,差异具有统计学意义(P<0.05).pcDNA-HOTAIR组IUA HESC细胞中COL1A1/GAPDH、FN/GAPDH、α-SMA/GAPDH表达水平高于Ct组、pcDNA组,差异具有统计学意义(P<0.05);si-HOTAIR组IUA HESC细胞中COL1A1/GAPDH、FN/GAPDH、α-SMA/GAPDH表达水平低于Ct组、si-NC组,差异具有统计学意义(P<0.05);si-HOTAIR+miR-326 inhibitor组IUA HESC细胞中COL1A1/GAPDH、FN/GAPDH、α-SMA/GAPDH表达水平高于si-HOTAIR组、si-HOTAIR+inhibitor NC组,差异具有统计学意义(P<0.05).miR-326 mimic和HOTAIR野生型质粒(HOTAIR-WT)共转染组的荧光素酶活性低于mimic NC和HOTAIR-WT共转染组,差异具有统计学意义(P<0.05);miR-326 mimic和NUS1野生型质粒(NUS1-WT)共转染组的荧光素酶活性低于mimic NC和NUS1-WT共转染组,差异具有统计学意义(P<0.05).bio-lncRNA HOTAIR沉淀中的lncRNA HOTAIR和miR-326水平均显著高于bio-NC,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 沉默HOTAIR可能通过上调miR-326来抑制NUS1表达,进而抑制IUA HESC细胞增殖、纤维化,促进细胞凋亡.

关键词：同源框转录反义RNA、miR-326、宫腔粘连、增殖、纤维化

所属期刊栏目：18

分类号：R737.33;R34;S826.2

资助基金：LncRNA-ATB通过吸附调控和表达参与宫腔粘连纤维化发病的研究项目LncRNA-ATB;miR-200c;FOXF2;Smad6;A2022374

在线出版日期：2023-02-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：165-172