miR-1与miR-499调控心肌细胞增殖与凋亡机制研究

摘要：

目的 探究微小RNA(miR)-1与miR-499在心肌细胞增殖与凋亡过程中的调控作用及其机制.方法 选取大鼠H9C2心肌细胞株,培养DMEM培养基,将培养好的H9C2心肌细胞分为空白对照组、阴性对照组(采用随机合成的miRNA片段通过脂质体2000转染试剂进行转染)、miR-1 inhibitor组(采用随机合成的miR-1 inhibitor片段通过脂质体2000转染试剂进行转染)、miR-499 mimics组(采用随机合成的miR-499 mimics片段通过脂质体2000转染试剂进行转染).采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测转染情况,设置空白对照组、H2O2组(未进行转染的H9C2心肌细胞)、干预组A(miR-1 inhibitor转染的H9C2心肌细胞)、干预组B(miR-499 mimics转染的H9C2心肌细胞)、干预组C(miR-1 inhibitor+miR-499 mimics转染的H9C2心肌细胞).通过H2O2诱导建立H9C2心肌细胞氧化应激模型.采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Western Blot检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、特异性半胱氨酸酶3(Caspase-3)蛋白表达水平.结果 miR-1 inhibitor组的心肌细胞miR-1表达明显低于空白对照组和阴性对照组,miR-499 mimics组心肌细胞miR-499表达明显高于空白对照组和阴性对照组,差异具有统计学意义(P<0.05).空白对照组与阴性对照组的miR-1与miR-499表达比较差异均无统计学意义(P>0.05).与空白对照组的(0.47±0.23)OD比较,H2O2组心肌细胞增殖(0.12±0.09)OD显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05);与H2O2组比较,干预组A心肌细胞增殖(0.27±0.12)OD和干预组B心肌细胞增殖(0.29±0.13)OD均明显升高,干预组C心肌细胞增殖(0.36±0.17)OD进一步升高,但仍低于空白对照组,差异具有统计学意义(P<0.05).与空白对照组比较,H2O2组细胞凋亡率显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05);对比H2O2组,干预组A、干预组B细胞凋亡率均明显降低,干预组C细胞凋亡率进一步降低,但仍高于空白对照组,差异具有统计学意义(P<0.05).与空白对照组比较,H2O2组心肌细胞Bcl-2蛋白表达水平明显降低,而Caspase-3蛋白表达水平明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05);与H2O2组比较,干预组A和干预组B的Bcl-2蛋白表达水平均明显升高、Caspase-3蛋白表达水平均明显降低,但仍低于空白对照组,而干预组C的Bcl-2蛋白表达水平进一步升高、Caspase-3蛋白表达水平进一步降低,但仍高于空白对照组,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 miR-1与miR-499在心肌细胞增殖与凋亡过程中发挥重要的调控作用,miR-1可能通过下调Bcl-2、上调Caspase-3蛋白表达促进心肌细胞凋亡,而miR-499则通过上调Bcl-2、下调Caspase-3蛋白表达抑制心肌细胞凋亡,针对这两个环节进行干预有望成为将来临床治疗心脏疾病的新途径.

关键词：微小RNA-1、微小RNA-499、心肌细胞、细胞增殖、细胞凋亡

资助基金：浙江省医药卫生科技计划项目项目编号:2017KY539

在线出版日期：2020-05-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：192-194