重组小反刍兽疫病毒血凝素蛋白纯化体系的优化

摘要：

本试验利用发酵技术诱导表达了小反刍兽疫病毒H蛋白胞外区(PPRVtH),优化建立了 一套纯化重组PPRVtH的完整工艺体系.通过发酵表达获得的10 L菌液,菌体湿重约达30 g/L,均质机破碎菌体获得包涵体;Tris-0缓冲液(pH=8.0)洗涤包涵体3次,每1 g包涵体加入5 mL含20 mmol/L咪唑的Tris-E缓冲液(pH=8.0)重悬,4 ℃温和旋转溶解过夜,离心收集上清;按体积比1∶2将层析填料Chelaing Sepharose Fast Flow与上清混匀,以流速1～2 mL/min加入层析柱;依次通过10倍柱体积含50、100、400和500 mmol/L咪唑的Tris-E缓冲液(pH=8.0),4 ℃静置2 h进行洗脱.优化后的纯化体系可得到较纯的重组PPRV tH蛋白,利用灰度分析可知纯化后的重组PPRVtH蛋白纯度能达到85％.本试验提供的纯化体系可快速、简便、低成本、大批量纯化重组PPRVtH蛋白,而且纯化获得的PPRVtH蛋白具有良好的反应原性.

关键词：小反刍兽疫病毒、血凝素蛋白、蛋白纯化、优化

所属期刊栏目：54

分类号：S852.659.5(动物医学（兽医学）)

资助基金：边境地区;重要口岸动物病原监测溯源技术研究项目;兰州市人才创新创业项目

在线出版日期：2024-01-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：79-86