Crabp2对猪卵泡颗粒细胞凋亡的影响

摘要：

为了研究胞质视黄酸结合蛋白2 (cytoplasm retinoic acid binding proteins 2,Crabp2)对猪卵泡发育的调控作用及机制,笔者通过构建猪Crabp2过表达载体并设计Crabp2 siRNA干扰片段,揭示它们对猪卵泡颗粒细胞凋亡的影响.通过从屠宰场回收猪卵巢,应用TRIzol法提取组织总RNA,并反转录成cDNA.设计Crabp2基因全长引物,利用PCR克隆Crabp2基因,构建Crabp2过表达载体.同时,设计并筛选出干扰效率最高的Crabp2 siRNA.将Crabp2过表达载体和siRNA片段分别转染至猪卵泡颗粒细胞中24 h,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白质免疫印迹(Western-blot)检测颗粒细胞Crabp2的表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡率的变化,同时检测线粒体凋亡通路和死亡受体凋亡通路相关基因Bcl-2、Bax、Caspase-3、Fas及FasL的表达变化.对照组为转染pcDNA 3.1(+)空载体和siRNA阴性对照(NC)片段的卵泡颗粒细胞.结果 显示,Crabp2过表达载体转染猪卵泡颗粒细胞可使细胞Crabp2的表达极显著升高(P＜0.01),同时显著降低细胞凋亡率(P＜0.05),而细胞凋亡通路中抑凋亡基因Bcl-2的表达显著升高(P＜0.05),促凋亡基因Bax、Caspase-3、Fas极显著降低(P＜0.01),FasL显著降低(P＜0.05).与此相反,Crabp2 siRNA片段转染猪卵泡颗粒细胞可使细胞Crabp2的表达极显著降低(P＜0.01),同时显著增加细胞凋亡率(P＜0.05),而Bcl-2的表达显著降低(P＜0.05),Bax、Caspase-3和FasL极显著升高(P＜0.01),Fas显著升高(P＜0.05).结果 表明,Crabp2可能通过抑制Fas/FasL介导的死亡受体凋亡通路和线粒体凋亡通路,进而抑制猪卵泡颗粒细胞凋亡,从而参与调控猪卵泡的发育.

关键词：猪、Crabp2、卵泡颗粒细胞、凋亡

所属期刊栏目：52

分类号：S852.21(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金;湖南省自然科学基金青年基金项目;中国博士后科学基金面上项目;湖南省教育厅优秀青年项目

在线出版日期：2022-03-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：111-119